精子载体制备FecB转基因太行山羊技术的研究.pdf

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1、单位代码：学号："‘。，瓤鼍；．^．100862008434精子载体法制备FecB转基因太行山羊技术的研究Studyonsperm--mediatedgenetransferofFecB‘rn●’transgenic1alhanggoat学位申请人：指导教师：学科专业：学位类别：授予单位：答辩日期：崔凯刘月琴教授动物遗传育种与繁殖农学硕士河北农业大学二。一一年六月一日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑皇堡

2、垒些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：楂凯签字日期：少11年莎月弓FI学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑宴堡盎些基堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦盔些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：崔物u’导师签名：签字日期：为1f年∥

3、月；日签字日期：矽11年∥月雩日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：旧㈣fu脚inJ!㈣nnnllIIIll㈣111

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6、fY1897289。‘莲暑C外源基因的载体，在受精时将外源基因导入卵母细胞，使受精卵中含有外源基因，是目前转基因动物研究中简单而高效的方法之一。脂质体可用于转基因的研究，利用脂质体可以和细胞膜融合的特点，将外源基因送入细胞内部。本实验利用脂质体介导精子转染的方法，研究了精子在介导基因转移过程中精子与外源基因结合的影响因素，并对精子载体法制备FecB转基因太行山羊进行了初步研究。试验结果如下：1．精

7、子充分离心洗涤后，再与脂质体．DNA复合物混合，可显著提高脂质体介导精子转染外源DNA的效率。DNasel消化前，洗涤组转染精子阳性率为38％，而未处理精液组精子阳性率为14％；DNaseI消化后，洗涤组转染精子阳性率为21％，而未处理精液组精子阳性率为5％，差异极显著(P

8、加至38．7％，两法的统计学分析存在显著性差异(P<0．01)。3．利用共培养法转染外源DNA，用DNaseI消化后，能检测到精子中外源DNA的存在，山羊精子具有自发的结合外源DNA的能力。4．对18只太行山羊母羊进行诱导发情处理，精子与FecB基因共孵育后，对发情母羊进行输精，受孕率为51％，共产生后代12只，经过PCR检测，未发现阳性后代。关键词：精子载体法；脂质体：转基因；FecB基因；太行山羊mediatedgenetransferofFeeBtransgenicTaihanggoatPostgraduate：CuiKaiMajor：AnimalGen

9、eticsandBreedingTutor：LRJYueqin(Professor)AbstractSperm-mediatedgenetransferisthesimpleandefficientmethodoftransgenicanimalwhichreferstothespermasthecarrierofforeigngenesintooocyteswhenfertilization，thefertilizedeggcontainstheforeigngene．LiposomesCanbeusedintransgenicresearchowingto

10、itsfunctionthatcouldcarrytheforeigngeneintothecellinteriorbymembranefusion．Thisstudyfocusontheinfluencingfactorsofthespermbindingwiththeforeigngenesintheprocessofthesperm-mediatedgenetransferandpreliminarystudiesofsperm—mediatedgenetransferofFecBtransgenicTaihanggoat，theresultsareas

11、follows：1．Washingth