长穗偃麦草中AP2EREBP类转录因子基因的克隆与功能验证.pdf

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1、分类号：S512：!密级：公压单位代码：学号：100862008294长穗偃麦草中AP2／EREBP类转录因子基因的克隆与功能验证CloningandCharacterizationofAP2／EREBPFamilyTranscriptionFactorGenesfromElytrigiaelongata学位申请人：默韶京指导教师：刘桂茹教授郎明林副研究员学科专业：作物遗传育种学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一一年五月二十九日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取

2、得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑i垦盔些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：歇玄己嗜＼签字同期：伽／f年∥月∥同学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇垦盔些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑i垦盔些盘鲎可以将学位论文的全部或部分内

3、容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：涿秀己吻、导师签名：签字日期：仍7／年厂月万日签字日期：勿／／年／月／日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：AmpBLASTcDNACefCmDEPClPTGKanLBMSNAANCBIORFOD260OD280PCRRT．PCRRifrmpTaqTBEX—gal6．BA本文所用缩略词及中文对照AmpicillinBasiclocalalignmentsearch

4、toolComplementaryDNACefotaximeCetyltriethyminetetradeticacidDiethylpyrocarbonateIsopropyl-p-D-thiogalactopyranosideKanamycinLuria—bertanimediumMurashigeandSkoogmedium1-naphthlceticacidNationalCenterforBiotechnologyInformationOpenreadingframeAbsorbanteat260nmAbs

5、orbanceat280nmPolymerasechainreactionReversetranscription-polymerasechainreactionRifampicinRevolutionperminuteThermusaquaticusDNApolymeraseTris．Boricacid．ED弱buffer5-bromo-4-chloro-3-indolyl-B—D—galactoside6-Benzylaminopurine氨苄青霉素基本的局部序列联配搜索I：具互补DNA头孢噻肟十八烷基三乙基溴化

6、铵焦碳酸二乙酯异丙基一B．D硫代j}，．乳糖苛卡那霉素LB培养基MS培养基a．荼乙酸美国国家生物信息中心开放阅读框260nm处的吸光值280nm处的吸光值聚合酶链式反应反转录聚合酶链式反应利福平每分钟转速栖热水生菌DNA聚合酶Tris．硼酸缓冲液5一溴4．氯．3．吲哚．B．D．j卜乳糖苷6．苄氨基腺嘌呤惴4㈣2㈣乃㈣9㈣8脚1册Y摘要干旱、盐碱、低温等非生物逆境胁迫对植物的生长发育有重大的影响，是造成农作物减产的直接原因。这些逆境因子会引起植物体内产生一系列生理生化变化以响应外界环境的变化。转录因子是能够与真核基因启

7、动子区域中顺式作用元件发生特异性作用的DNA结合蛋白，通过它们与顺式元件及其它相关蛋白之间的相互作用，可激活或抑制下游一系列功能基因的转录。植物中的AP2／EREBP类转录因子基因受到干旱、高盐、低温等逆境因子诱导会启动下游一系列抗逆功能基因的表达，对提高植物的综合抗逆性具有重要科学意义和应用价值。本研究利用同源序列克隆方法，结合RACE(rapidamplificationofcDNAends)和GenomeWalking技术，从抗逆性优良的野生十倍体长穗偃麦草(Elytrigiae肠ngam，2n=70)中克隆了

8、AP2／EREBP家族的两个逆境高丰度表达基因的全长cDNA，分别命名为EeAP2．j．J和EeAP2．2。序列分析表明，EeAP2．J．J具有一个1179bp的丌放阅读框，编码392个氨基酸残基，含有一个保守的AP2结构域，属于EREBP亚家族中的一个ERF转录因子基因。该基因编码的氨基酸序列与大麦基因HvERFl(GenBank登录号为AD