金鱼Striatin基因对金鱼胚胎发育的调控功能分析.pdf

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1、学校代码!Q5垒2密级金鱼Striatin基因对金鱼胚胎发育的调控功能分析FunctionalAnalysisofstriatingeneinRegulatingGoldfishEmbryonicDevelopment指导教师姓名、职称奎互猩敛援湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一一年五月摘要㈨IIIiiiirIllllfY191582蛋白磷酸酶．2A(PP2A)，是真核生物体内最主要的一种蛋白磷酸酶，它是一个异源三聚体，包括支架蛋白A亚基、催化C亚基以及调节亚基B。目前的研究表明调节亚基B，由超过16个不同基因编码，因此，除了有调节PP2

2、A活性的功能之外，很可能还有其它的功能。为了研究PP2A调节亚基在脊椎动物发育过程中充当怎样的角色，我们克隆了金鱼PRlIO／B川家族调节亚基striatin以及SG2NA，并且我们在金鱼的组织及胚胎中分析了这两个基因的组织特异性及发育表达模式。我们的结果显示striatin基因全长cDNA包含2349个核苷酸，推测其编码782个氨基酸；SG2NAa基因包含一个2118bp的开放阅读框，推测其编码705个氨基酸，其另外的一个变体SG2NA[3包含一个2148bp的开放阅读框，推测其编码715个氨基酸。PRlIO／BⅢ的这两个异构体与其它物种之

3、间显示出很高的同源性。Striatin基因的功能j除了作为PP2A的调节亚基之外，其它的功能目前还不是很清楚。本研究为了进一步研究Striatin基因在低等脊椎动物中的功能，首先，我们从金鱼的脑中提取了RNA，并通过反转录得到了striatincDNAs，再通过RT．PCR我们克隆了长约1000bp左右带酶切位点的基因片段。其次，使用反义RNA技术，前面得到的基因片段可以被反向的插入到pEGFP．C3载体(一种绿色荧光蛋白载体)中构成反义载体pEGFP-striatin．AS。最后，在金鱼胚胎lcell我们的结果显示：85％左右：通过对异常眼

4、睛的石蜡切片，我们发现金鱼胚胎眼睛的晶状体有明显的纤维症状，以及晶状体与视网膜上皮之间的间隙相对正常眼睛来说变得更加狭窄。此外，异常胚胎的眼睛中视网膜上皮细胞呈现不规则状态及增厚的现象。从这些结果我们不难看出Striatin基因在金鱼胚胎发育的过程中起着重要的作用。关键词：金鱼，PP2A，striatin，基因表达，分子克隆，胚胎发育，显微注射，表型缺失ⅡABSTRACTTheproteinphosphatase一2A(PP-2A)，oneofthemajorphosphatasesineukaryotes，isaheterotrimer,c

5、onsistingofascaffoldAsubunit，acatalyticCsubunitandaregulatoryBsubunit．PreviousstudieshaveshownthatbesidesregulatingspecificPP-2Aactivity,variousBsubunitsencodedbymorethan16differentgenes，mayhaveotherfunctions．ToexplorethepossiblerolesoftheregulatorysubunitsofPP一2Ainvertebra

6、tedevelopment，wehaveclonedthePR10／13Ⅲfamilyregulatorysubunits：SG2NAandstriatin，analyzedtheirtissuespecificanddevelopmentalexpressionpaaemsinGoldfish(Carassiusauratus)．Ourresultsrevealedthatthefull—lengtheDNAforstriatinconsistsof2349nucleotidescodingforadeducedproteinof782am

7、inoacids；Thefull—lengtheDNAforSG2NAcontainsanORFof218bpencodingadeducedproteinwith705aminoacids，andthesecondone2148bpcodingforadeducedproteinof715aminoacids．ThetwoisoformsofPR10／B¨’displayhighlevelsofsequenceidentitywiththeircounterpartsinotherspecies．Thefunctionsofstriatin

8、，exceptforactingastheregulatorysubunitsforPP一2A，remainlargelyunknown．Inthisstudy，w