金鱼胚胎发育过程中磷酸酶活性的变化

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1、万方数据第30卷第7期2011年7月水产科学FISHERIESSCIENCEVbI．30No．7Jul．2011金鱼胚胎发育过程中磷酸酶活性的变化王书平，孔祥会，江红霞，聂国兴，李学军(河南师范大学生命科学学院，河南新乡453007)摘要：以金鱼胚胎为研究对象，在金鱼受精后24h，每间隔24h取健康鱼卵，测定胚胎不同发育时期酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性。结果显示，胚胎受精24h时酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性较低，伴随着胚胎发育，酶活性均呈现增强的趋势，在144h达到最高。金鱼胚胎发育中酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的

2、活性随发育时间呈现上升趋势，以此满足胚胎发育中细胞增殖、信号传导和物质代谢等对磷酸酶不断增长的需求。关键词：酸性磷酸酶；碱性磷酸酶；胚胎发育；金鱼中图分类号：S965．8文献标识码：A文章编号：1003—1111(2011)07—0405-04酸性磷酸酶和碱性磷酸酶广泛存在于各种动物体内，是非特异性的磷酸单酯水解酶。它们分别在酸性和碱性条件下起催化作用，直接参与磷酸基团的转移与代谢。酸性磷酸酶和碱性磷酸酶是动物体内的重要解毒酶系，在细胞调节和营养物质的消化、吸收及转运过程中都起着重要作用C1]。作为物质代

3、谢过程中的重要调控酶，酸性磷酸酶和碱性磷酸酶对鱼类的生长和发育极为重要。酸性磷酸酶主要定位于溶酶体和内膜系统c2]，是溶酶体的标志酶。在酸性环境中，通过酸性磷酸酶的水解作用，破坏表面带有磷酸酯的外源异物，预防感染D]，发挥着免疫的功能。碱性磷酸酶则是一类膜结合糖蛋白[41，在调节跨膜运输[33及生物体内DNA、RNA、蛋白质和脂类等物质代谢中起着重要作用。鱼类胚胎发育是鱼类生命过程的关键时期，在如此短的时间内却要实现形态、代谢和生理上的巨大变化，酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的活性亦应伴随胚胎发育而发生相应的变化

4、。迄今为止，关于仔稚鱼发育过程中磷酸酶的活性变化和水生动物早期发育过程中磷酸酶的表达模式等已有研究陆71，孙虎山等哺1也对贻贝(蜘Ⅲ“sPd乱胁)的卵、胚胎和早期幼虫的酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性进行了研究，但国内外有关鱼类胚胎发育过程中酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性变化的研究却未见报道。笔者就金鱼(已rnssf牡s口“地￡“s)胚胎发育过程中酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性的变化进行研究，以期进一步理解金鱼胚胎发育过程中生理生化的动态变化，为指导金鱼的人工繁殖提供理论依据。1材料与方法1．1受精卵采集人工授精后，获

5、取金鱼受精卵，随机分组，每组约600粒，置于含500ml试验用水的培养皿(直径20cm，高3cm)中。每组设3个平行。试验用水为充分曝气的自来水，每24h换水约3／5。试验期间水温控制在(18士1)℃。鱼卵受精24h后开始取样(此时用肉眼较易区分出受精卵和未受精卵)。随后分别于48、72、96、120、144h取样。胚胎发育过程中，及时清除未受精卵和异常胚胎。1．2样品制备每组分别取受精卵100粒，用滤纸吸干，置于离心管中，贮存于冰箱一80℃保存备用。制样时，受精卵整体匀浆，按质量体积比1：4(g／m1)

6、加入生理盐水，冰浴匀浆，4℃，12000r／min离心10min，取上清液，分装储存于冰箱一20℃保存待测，于一周内测完。1．3测定方法1．3．1匀浆粗提液蛋白定量粗提液蛋白定量参照Bradford测定方法‘91。收稿日期：2010—11—08；修回日期：2010—12一08．基金项目：河南省科技厅重点科技攻关计划项目(072102130027)l河南省教育厅高等学校青年骨干教师计划项目(Z007)；河南省科技厅水产养殖学重点学科项目(2009)．作者简介：王书平(1984一)．男．硕士研究生．研究方向：

7、鱼类功能基因组和环境响应；E-mail：spw04@126．com．通讯作者。孔祥会(1968一)，男，教授，博士．研究方向；鱼类功能基因组和环境响应；E-啪il：xhkong@htu．cm万方数据水产科学第30卷以牛血清白蛋白(BsA，购于AMRESCO公司)作为标准蛋白。1．3．2酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性测定酸性和碱性磷酸酶活性测定采用磷酸苯二钠法m]，酸性磷酸酶和碱性磷酸酶酶活测定缓冲液pH值分别为4．9、10。酶活性定义为：37℃下，反应体系中每分钟每克蛋白产生1mg酚所需的酶量为1个酶活性单位

8、(1U)。1．4数据处理试验数据以平均值士标准差(M士SD，n=6)表示。采用单因素方差分析(One-wayANOVA)检验组间差异显著性，统计显著性水平设定为P=O．05。2结果与分析受精后24h金鱼胚胎大部分发育至原肠胚期；120h大部分胚胎孵出；至144h，胚胎已全部孵出。总之，整个取样过程处于由原肠胚期至初孵仔鱼阶段。2．1酸性磷酸酶活性变化金鱼胚胎发育24h，酸性磷酸酶活性最低，酶活为(o．674±O．070)U／g