兴安落叶松转录因子CBF1和Actin基因的克隆及特性分析.pdf

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1、学校代码!Q12鱼分类号——UDC论文题目学号三Q墨Q墨Q!Q密级——编号——院(系)名称生金抖堂堂医专业名称植物堂年级2QQ墨学生姓名筮雯曩指导教师迕旦墓教援挞瞳飞副熬援2011年6月6日DD厄RMONGOLIAUNr、厂ERSITYHUHHOT,010021，ER．CHINA6几烈E，2011原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除本文已经注明引用的内容外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得内蒙古大学及其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的

2、任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：l艇指导教师签名：日期：塑!：厶!!竺日期：，塑l!!芝：也在学期间研究成果使用承诺书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：内蒙古大学有权将学位论文的全部内容或部分保留并向国家有关机构、部门送交学位论文的复印件和磁盘，允许编入有关数据库进行检索，也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文。为保护学院和导师的知识产权，作者在学期间取得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后使用涉及在学期间主要研究内容或研究成果，须征得内蒙古大学就读期间导师的同意；若用于发表论文，版

3、权单位必须署名为内蒙古大学方可投稿或公开发表。学位论文作者签名：二龃指导教师签名：学位论文作者签名：冷垒立指导教师签名：Et期：鎏!：鱼生日期：兴安落叶松转录因子CBFl和Actin基因的克隆及特性分析摘要低温是诸多非生物因素中对植物危害最为严重的胁迫因子之一，它极大地限制了植物正常代谢和分布地域。植物自身拥有一套抵低温的机制，例如改变生物膜的性质，渗透调节等，而这些代谢活动的改变都离不开抗寒基因的表达调控。CBF(CRT-bindingfactor)转录激活因子是一类受低温特异诱导的反式作用因子，它们可以调控多个抗寒基因启动子上的顺式作用元件，诱导启

4、动子中含有这一调控元件的多个冷诱导基因的表达，从而激活植物体内的多种抗寒机制。因此，CBF基因的表达及调控机理的研究对于阐明植物的抗寒机理具有重要意义。在本研究中，我们克隆了兴安落叶松的CBFl同源基因序列，命名为LgCBFl，并调查了该基因的表达特性。兴安落叶松是我国东北、内蒙古林区以及华北、西南的高山针叶林的主要森林组成树种，在针叶树种中是最耐寒的，所以对LgCBFl基因的研究可为解明兴安落叶松的抗寒机理、开发其抗寒基因资源提供依据。另外，由于在检测LgCBFl表达特性的实验中需要一个稳定表达的内参基因，我们分离了兴安落叶松的肌动蛋白基因(LgAc

5、t)，并对其基因结构和系统发育关系进行了分析。LgAct基因的分离对于以此基因为内参，研究兴安落叶松其他基因的表达和调控奠定了基础。该研究的主要结果如下：1．采用简并．PCR的方法克隆了兴安落叶松低温诱导转录因子LgCBFl基因序列，利用BLAST比对分析发现，该LgCBFl基因序列与其它物种CBFl基因间具有很高的同源性。2．采用半定量PCR的方法对LgCBFI基因在冷胁迫下(4℃)的mRNA表达量调查结果显示：在持续的冷胁迫下，LgCBFl被快速诱导。在低温处理6h后期表达量达到峰值，但在低温胁迫解除后(转移到22℃)30mill，其mRNA水平明

6、显下降，这显示出CBFl基因在植物对抗冷胁迫的途径中的快速的调控机制。3．采用简并一PCR和RACE技术克隆了兴安落叶松的肌动蛋白基gacO。该基因cDNA全长1662bp，编码377个氨基酸；基因组DNA长度约为2564bp，包含4个内含子，5个外显子。所克隆的LgActcDNA序列与GenBank中注册的其它植物肌动蛋白核苷酸序列的相似性均在77％以上，氨基酸序列的相似性高达93％以上。根据高等植物肌动蛋白相似性构建的系统树显示，兴安落叶松肌动蛋白与挪威云杉肌动蛋白之间的亲缘关系较为密切，在进化中分化时间最为接近。关键词：兴安落叶松(Larixgm

7、elinii)，Actin，CBFl，基因克隆，表达特性CLONⅡ可GANDCHARACTERIZATIONOFTRANSCRⅡ，TIONFACTORC差}．FJAND彳C删GENEABSTRACTLowtemperatureisoneofthekeyfactorsthatgreatlyrestrictsgrowthanddistributionofplants．Planthasspecificmechanismtoresistlow-temperaturestress，suchasregulatingthecharacteristicofbiomem

8、brane，osmoregulation,andSOon．Cold—regulated(COR