亚硝酸盐的测定(精).doc

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1、亚硝酸盐的测定一、目的与要求   1、明确亚硝酸盐的测定与控制成品质量的关系。   2、明确与掌握盐酸萘乙二胺法的基本原理与操作方法。   二、原理   样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，生成的重氮化合物，再与盐酸萘乙二胺偶合成稳定的紫红色染料，在538nm处有最大的吸收，产生的颜色深浅与亚硝酸根含量成正比，可以比色测定。反应式如下：三、试剂与仪器1、亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾[K4Fe9(CN)5.3H2O]，溶于水后，并稀释至1000mL。 2、乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌[Zn(CH2C00)2·2H20]，加30mL冰乙酸溶于水，并

2、稀释至1000mL。   3、饱和硼砂溶液：称取5g硼酸钠[Na2B07·10H20]，溶于100mL热水中，冷却后备用。   4、0.4％对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20％的盐酸中，避光保存。5、0.2％盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL水中，避光保存。6、亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000g事先于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每mL相当于200μg亚硝酸钠。   7、亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00mL，置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每

3、mL相当于5μg亚硝酸钠。8、研钵。   9、分光光度计。 四、操作方法   1、样品处理：称取5.0g经绞碎混匀的样品，置于50mL烧杯中，加12.5mL硼砂饱和溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL，将样品全部洗入500mL容量瓶中，置沸水浴中加热15min，取出后冷至室温，然后一面转动一面加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混匀，放置0.5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。   2、测定吸取40mL上述滤液于50mL比色管（容量瓶）中，另吸取0.00、0．40、0.80、1.00、2.50mL亚硝酸钠标准使

4、用液(相当于0、2、4、5、12.5μg亚硝酸钠)，分别置于50mL比色管（容量瓶）中。于标准与样品管中分别加入2mL0.4％对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3-5分钟后各加入1mL0.2％盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15分钟，用2厘米比色杯，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。五、结果计算式中：X：样品中亚硝酸盐的含量，mg／kg；m：样品质量，g；A：测定用样液中亚硝酸盐的含量，μg；