【技术资料】多色流式实验荧光素的选择.doc

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1、【技术资料】多色流式实验荧光素的选择近十年来流式细胞仪已经成为临床医生、免疫学家和细胞生物学家必不可少的工具，这项技术在不断进步。流式细胞仪的多参数细胞分析这一独特的功能让大多数细胞分析成为了可能。Coon首先提出了荧光抗体标记细胞内的目的蛋白技术，在20世纪80年代，细胞亚群仅仅通过检测单一的细胞表面标志物来确定，使用的单抗和荧光素很受限制。基因表达技术的诞生和新的单抗以及荧光素的获得使更复杂的多参数分析成为可能。1.常用荧光素的种类及特性1）.FITC（Fluorescein）又称异硫氰酸荧光素，其标记的抗体适用于

2、所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；FITC的最大发射波长为525nm，在流式细胞仪的FL1通道检测。2).PE（R-Phycoerythrin）又称藻红蛋白，有R-PE和RD1的别称，其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；PE的最大发射波长为575nm，在流式细胞仪的FL2通道检测。3).PE-TR（PE-TexasRed）/ECDPE-TR又名ECD，是由PE和TexasRed（TR）组合而成的Tandem荧光素；其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；PE-T

3、R的最大发射波长为615nm，在流式细胞仪的FL3通道检测；PE-TR标记的抗体可用于毫瓦级激光器的小流式细胞仪，也适用于配备有全功率激光器的大流式分选仪。4).PI（PropidiumIodide）又称碘化丙啶，其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；PI的最大发射波长为617nm。在流式细胞仪的FL3通道检测。5).PE-Cy5（TRI-COLOR，TC）又称TRI-COLOR或TC，是由PE和Cy5组合而成的Tandem荧光素；其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；P

4、E-Cy5的最大发射波长为670nm，在流式细胞仪上用FL3通道检测；PE-Cy5标记的抗体可用于毫瓦级激光器的小流式细胞仪，也适用于配备有全功率激光器的大流式分选仪。6).PerCP（Peridinin-Chlorophyll-ProteinComplex）多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物，其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；PerCP的最大发射波长为677nm。在流式细胞仪的FL3通道检测。7).APC（Allophycocyanin）又称别藻蓝蛋白，其标记的抗体适用于配备氦氖激光器发射波

5、长为633nm的多色流式细胞仪；APC最大发射波长为660nm，在流式细胞仪中只有配有双激光器的FL4才能检测。8).APC-Cy7是由APC和Cy7组合而成的Tandem荧光素；其标记的抗体适用于配备氦氖激光器发射波长为633nm的多色流式细胞仪，APC-Cy7主要用于四色以上的流式细胞术。2.常见荧光素荧光强度比较荧光的强度与染色指数(StainIndex)有关，染色指数的计算：StainIndex=D/W，染色指数越高，荧光强度越好；染色指数较低，染色强度相对较差：通过染色指数可以看出各个荧光素的强度：PE>AP

6、C>FITC>PerCP3.多色流式细胞检测中荧光素选择的原则a).根据机器配置选择荧光素比如BDcalibour流式仪，配置有两色激光，能够做4个通道的荧光素，需根据对应的激光激发波长和检测通道选择合适的荧光抗体488FL1BP530/30515-545FITC,AlexaFluor488FL2BP585/42564-606PEFL3670LP〉670PE-Cy5,PerCP,PE-Cy7635FL4BP661/16653-669APC,AlexaFluor488