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1、流式细胞术多色检测达科为生物技术有限公司杨培2013.04.09主要内容流式检测原理流式细胞术多色检测Biolegend产品介绍流式数据分析软件介绍FCS4—DeNovoSoftware流式检测原理流式细胞术概述流式细胞术（FlowCytometry,简称FCM）是一种以流式细胞仪为检测手段，可以快速、准确、客观，同时检测单个生物微粒的多项特性，并加以定量的技术，同时可以对特定群体加以分选。特点:研究对象为生物颗粒，如各种细胞、染色体、微生物、人工合成微球等快速、准确、高通量检测多参数、多
2、色荧光分析，对细胞特性的识别、计数更为准确定性或定量分析细胞分选特定性状或功能的细胞流式抗体—荧光素Cy5Alexa488AlexaCy5488PEAlexa488Cy5合成的有机物蛋白半导体纳米有机聚合物AlexaFluors,PE,Qdots,Cydyes,APC,GFP,Crystalplex,BrilliantVioletHorizon,mCherryeFluorNCDylight,etcCollisionalQuenching荧光素淬灭流式抗体—常用荧光素•Blue（488nm）•Viole
3、t（405nm）–FITC–AmCyan–AlexaFluor488–BrilliantViolet421–PE–PacificBlue–PerCP–BrilliantViolet510–PerCP-Cy5.5–BrilliantViolet570–PE-Cy5–BrilliantViolet605–PE-Cy7–BrilliantViolet650–PI–BrilliantViolet711–7-AAD–BrilliantViolet785•Red（633nm）–Qdot605–APC•UV(360nm
4、）–APC-Cy7–DAPI–AF647–AF700耦合荧光素M1M1Competitor1BioLegendanti-MouseCD3e,clone145-2C11-PE/Cy5耦合荧光素不同厂家，抗体荧光强度不同耦合荧光素对光、对固定剂更敏感流式细胞仪及其结构液流系统光学系统数据处理系统流式细胞仪—光路图检测装置：滤光片流动室激光光源流式细胞仪—信号检测信号检测—散射光信号测向角检测器LasersSC激光光源前向角检测器前向角散射光（FSC）：反映相对大小FSC侧向角散射光（SSC）：反映细胞
5、粒度及细胞内相对复杂性FSCSSC外周血细胞散射光双参数点图全血溶红后流式检测图信号检测—荧光素荧光信号非特异荧光信号的排除抗体FC段非特样本管同型对照阴性对照异性结合位点（普遍存在）加入正常抗体加入同型抗体加PBS检测抗原位点荧光组成荧光组成荧光组成1、细胞自发荧光1、细胞自发荧光1、细胞自发荧光2、非特异性标记荧光2、非特异性标记荧光3、特异性标记荧光TruStainFcX(anti-mouseCD16/32),#101319humanTruStainFcX,#422301去除死细胞的非特异荧光信号死
6、细胞因细胞膜已失去完整性，所以很容易与抗体结合，造成非常强的非特异性染色。一般来说，当细胞标本中的死细胞数目超过5%时，需重新采集标本，或使用“死细胞排除试剂盒”来排除死细胞的干扰。实验计划试剂选择（死活细胞检测）进行活细胞检测，无需细胞固定PI,或者7-AAD,或者ZombieAqua™（如细胞分选）先固定细胞，在进行流式抗体染色ZombieAqua™先进行流式抗体染色，再固定细胞ZombieAqua™做胞内流式检测ZombieAqua™荧光补偿调节方法流式数据分析APC-A双参数散点图单参数直方图三维
7、图等高线图流式细胞术常用分析软件仪器自带分析软件BDcellquestBDFacsDiva。。。第三方分析软件流式细胞术多色检测流式抗体--荧光素种类Cy5Alexa488AlexaCy5488PEAlexa488Cy5合成的有机物蛋白半导体纳米有机聚合物AlexaFluors,PE,Qdots,Cydyes,APC,GFP,Crystalplex,BrilliantVioletHorizon,mCherryeFluorNCDylight,etcBrilliantVioletTM荧光素家族(7个成员）
8、BrilliantVioletTM421BrilliantVioletTM510BrilliantVioletTM570BrilliantVioletTM605BrilliantVioletTM650BrilliantVioletTM711BrilliantVioletTM785BrilliantVioletTM荧光素家族BrilliantViolentTM简称“BV”，是诺贝尔奖获得者发明的“最新一代”的荧光染料，“BV”染
