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1、流式细胞技术与流式细胞仪何克健(安徽医科大学附属医院医学工程部,安徽合肥230022)〔文章编号〕1002-2376(2000)05-0006-03〔中国分类号〕TH773〔文献标识码〕B〔摘要〕流式细胞技术在细胞定量检测方面是最先进检测技术,流式细胞仪在临床和科研领域得到广泛运用。〔关键词〕流式细胞技术细胞检测概述:主要检测:DNA含量,RNA含量,总蛋白含量,分析细胞学是细胞定量分析的学科,流式细胞细胞原构成,酶活性及定位小细胞钙离子,细胞内技术(FlowCytometer,FCM)是分析细胞中的一pH细胞膜定位,细胞膜流动性或微
2、粘度等。(3)个重要领域,该技术为细胞学研究手段之一,能够细胞分选内部参量或外部参量的不同。FCM可将对细胞和细胞器及生物大分子进行高达每秒上万个某一特定亚群从细胞总体分选出来,以待做进一步染色体的分析,而且一个细胞多参数分析并可分选的研究,这一功能在克隆方面有重要的意义。细胞。这种以流动的方式(相对静态方式)测量细细胞抗原表型分析,这是FCM在血液病学中胞与传统的用荧光镜检测细胞比较,具有速度快,应用最广泛的领域。流式细胞术在该领域里显示出精度高,准确性好的特点,可以说FCM是目前最其快速大量检测细胞和多色标记的优点,使免疫表先进的
3、细胞定量分析技术。该仪器在医学和基础生型分析更加快速、客观、准确。命科学中得到广泛应用。也就是说流式细胞术已应用FCM技术分析和分选标本染色体是分子生用于免疫学,生物学等临床医学和基础医学研究领物学,遗传学研究的一个非常有效的方法。采用双域。下面做一简单介绍。激光的方法,研究者可进行核型分析和鉴定,分离细胞凋亡是当前研究的热点之一,检测凋亡有纯化某号染色体并构建染色体特异性DNA文库。多种方法,FCM的优点是:(1)能快速客观高灵后者在遗传病基因定位、基因克隆方面发挥重要作敏度地进行多参数地测定样本细胞中的生物学变用。其实流式细胞术在
4、生物学中的发展,主要得益化。(2)定量测定凋亡指数,可同时测定凋亡细胞于克隆抗体技术的发展,这两者的发展是相辅相成与细胞周围的关系。(3)同时测定细胞增殖率与死的。亡率,从而可了解肿瘤的增长速度。(4)测定单细流式细胞仪主要部件及其作用:胞为基础的凋亡相关基因蛋白的变化以探讨凋亡分光源:光源有相干光源和非相干光源。非相干子机制与细胞周期的关系。(5)从治疗过程中肿瘤光源一般来自灯和汞灯。此类弧光灯的发光是电流细胞死亡速率可早期了解药物的疗效。随着FCM经过气体时,造成气体电离所产生的。它能提供最凋亡检测方法的敏感性和特异性不断的提高,
5、有望佳的激发波长。选择汞灯和灯的原则是能提供最大做到更客观地反映凋亡这一复杂的现象。的荧光激光能量。但弧光灯在单一谱线上能量较弱血液学研究的主要内容是血液和骨髓,而这两且功率不稳,己逐步被激光光源代替。者均为天然的单细胞悬液,并且易于反复采集,这相干光源常用Ar+激光,He—Ne及染料激正符合FCM的标本要求。细胞流式术在这里起的光,其中氩离子激光器在紫外范围也可激发染料,作用是:(1)对细胞内部参量的检测,利用细胞对适合DNA分析和使用特殊荧光染料情况。因此成光的散射,可获得有关细胞大小(与前向角散射有为流式细胞仪中使用最广泛的激光
6、源。它在488nm关)和粒度的信息(与侧向角散射有关)。(2)细时呈兰色激光。此光源能提供极高的照射光强,稳胞外部参量的检测。待测细胞经荧光染成标记后,定性高,发射散角小,能聚焦到细胞大小的线度范围内。常用的还有He—Ne激光器(633nm),用收稿日期:1999-12-23于光散色的测量。由于染料激光器的波长能连续调6MedicalEquipmentVol113,No15节的特点,因此也逐步地被用于流式细胞仪中。随散色光也能碰到透镜面而被聚焦。为了挡住来自液着激光器质量不断提高和价格的降低,以激光器为流的光线,第一透镜面前加一激光吸
7、收器,并用滤激发光源已成为主流产品的标准配置。目前又出现波片滤去被测光束不需要的光。了半导体激光器。分选器:细胞的分选是通过分离含有单细胞的流动室:细胞流动室是流式细胞仪中最重要的滴液实现的。流式细胞仪运用滴液偏转的方法可将部分。无论何种类型的流动室,其目的都是使细胞不同的细胞从细胞群体中分离出来。当液滴进入分流稳定流动,依次通过固定的检测区。细胞悬浮在选室时是不带电的,当液滴将要从液流中断开的时携带的液体中,当液体细胞进入测量区的过程中会候,要给液滴加电(2kV～6kV)。这样滴液在从产生层流和湍流,在此采用了鞘流原理,标本在压液流
8、上断开落下后带同性电荷。下落的滴液通过一力的作用下以恒定的速度(5—10m/s)进入流动个由平行板电极形成的静电场,带正电荷的滴液向室,同时鞘液(sheathfluid)在高压下自鞘液管进负极偏转,带负电荷的液滴向正极偏
