羊肚菌菌种分离技术.docx

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1、原始菌种分离自野生材料或栽培材料。一般用野生或栽培果(子实体),也可用干子实体来进行分离,干子实体作菌料的成活率及子实体产量均比新鲜子实体作分离菌种的材更高。栽培子实体达到商业化采收标准时一般还没有成熟和子囊孢子也都未完全成熟;孢子分离需要将子囊孢子培养到完熟的状态,子实体已经倾斜或快要倒伏,外观形态表现为子囊果面有白色、灰白色的孢子粉出现时比较可靠。野生子实体成熟比较很小的子实体就已经形成了孢子,容易获得大量孢子粉。种菇的选择：选择菇形正常,菌盖圆整,顶端较尖,尖顶凸起完整,菌柄圆正,菌柄短而结

2、实,大小适中,无虫害、霉变或杂菌感染的子实体,鲜品或干品均可。种菇的采集：菌柄基部最好带少量土壤一起采集,用吸水纸包裹3层,再用报纸包裹,低温下带回实验室。不要把菌柄基部剪掉留下空心的子实体进行分离新鲜子实体采集后放在室内桌面或吸水纸上自然晾,稍稍除去部分水分,若采集地点离实验室很远或工作时间较长,可以晾干到子实体含水量在15%以下。标本用吸水纸包,再用报纸包裹,带回实将未成熟的栽培子实体采集后,可以放在室内假植几离。方法是移栽在盐内湿上上,培养儿天直到有子弹射为止,以便集孢于注意一般不要把标本放

3、入塑料袋内运送,也绝对不能用烘干的办法处理需要分离的标本。菌种分离一般不要采用传统教科书所叙述的方法,传统的方法都容易导致污染和不生长。为此本专著为大家特别介绍了下列的新方法。常见的分离方法有：纯组织分离法,分别有菌盖组织、菌柄组织,菌盖菌柄结合部位组织、组孢混合分离法、膨大细胞分离法、纯多孢分离法、单孢分离法等等。其中,上内菌丝分离比较困难。纯组织分离法：采野生或栽培的幼嫩体,用无菌吸水纸包裹,放于无菌纸袋内。0~4℃冰瓶保存。送到实验室,放在无菌培养皿内,在超净工作外线照射20min,具体可以

4、采用悬挂法、断斜面法。组织块悬挂分离法：将羊肚菌子实体撕开或用刀片切成两片,刮肉内壁的膨大细胞层。分别在菌柄内壁、菌盖内壁、菌柄与菌盖接部位取子实体内壁的中央菌丝组织。组织块大小为2~5mm,直接放在斜面培养基上方2~5mm高处,紧贴在无培养基的试管壁上,塞上棉塞,轻轻放在工作台上。在22~25℃避光培养,2~3d萌发出新菌丝,新菌丝长到培养基上5~10mm时,用烧红的接种铲烫死组织块及周围菌丝。继续培养24h,取菌落边缘的尖端菌丝接于新的斜面培养基上,再培养,如此2~3次得到纯种。断斜面分离法：

5、在斜面顶端2~3cm处用灭菌后的接种锄挖断,把斜面顶部的培养基往上拉动,留下5~13mm的无培养基的空白带,将铲取下来的菌肉组织块放在上面,培养几天后,菌肉组织萌发出新菌丝,新菌丝会穿过短斜面,长到下面的主培养基上。主培养基上有5~6mm长的菌丝后,用烧红的接种锄把原始接种的短斜面全部挖去,并灼烧试管壁,将原始菌丝和可能的杂菌污染烧掉。膨大细胞分离法：用冷却后的接种刀片轻轻刮取少量菌肉内壁的膨大细胞,转接到断斜面的上部培养基上,培养3-5d,长出新菌丝。组孢混合分离方法：野生的风干子实体切取组织块

6、时,很容易取到子实层的子囊孢子,放在断斜面的上方培养基上。菌肉组织菌丝和孢子萌发的菌丝混合生长,新菌丝穿过断面后,加入主培养基后,挖去接种物并灼烧,继续培养得到原始菌种。羊肚菌生物学基动、菌种分离菌丝分离法：原始的方法可以从土壤中进行分离,但是此法非常费力,成功的概率很低。快捷的方法可以从原种或栽培种、营养料袋中直接分离,得到试管菌种,羊肚菌子实体是一种疏松多孔的结构,类似于密度较大的海开放的条件下,其结构内表面除羊肚菌菌丝外,还有许多微生物生长,包括细菌、放线菌、霉菌等寄生菌,一般情况下用肉眼无

7、法判断。羊肚菌菌肉很薄,一般为3~5mm厚,与子实层紧密连接,组织分离时很容易取到孢子,孢子极容易萌发,因此很容易得到菌肉组织长出的菌丝和孢子长出的菌丝,后者常常是很多孢子长成的菌丝群体,这是一个在遗传学上混杂的培养物,能够出菇的菌株会表现出形态和产量等方面的多样性。组织分离菌种的注意事项如下：一般不要选择菌盖歪斜、顶部不尖或有明显病害的子实体。不要选择很老的子实体做组织分离,由于子实层已经发育成熟,很容易在取组织的同时取到孢子,成为混合菌种。而幼嫩的子实体不容易污染,组织分离容易成功。因为羊肚菌

8、菌丝体生长速度很快,采用悬挂法、断斜面法,羊肚菌菌丝很容易穿过没有培养基的试管壁,长到没有污染的主培养基上,即使原始接种块上有细菌或霉菌污染,其生长速度也不及羊肚菌,不容易跨过断面,羊肚菌新菌丝长入主培养基后,可以立即灼烧接种块,解决了分离容易污染的问题分离菌种一定不要用酒精、升求、来苏尔、煤酚皂、甲醛、三氯异氧尿酸钠等消毒剂对子实体表面进行消毒,因为这些消毒剂容易浸入子实体内部,杀死的丝,导致所有分离物都不成活：也不需要用无菌水多次清洗,水容易渗透入菌肉组织,把表面的杂菌带入接种