分子荧光法测定奎宁的含量-学生实验记录

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1、实验十一分子荧光法测定奎宁的含量一、实验目的1.了解荧光分光光度计的性能与结构，掌握仪器的基本操作；2．学会绘制荧光激发光谱和发射光谱图(即确定最大的lex和lem)；3．定量测定奎宁的含量（标准曲线法）二、实验原理奎宁在稀酸溶液中是强荧光物质，它有两个激发波长250nm和350nm，荧光发射峰在450nm。在低浓度时，荧光强度与荧光物质量浓度呈正比：If=kc，通过标准曲线法可以测定未知样品中的奎宁含量。三、仪器与试剂1．仪器：岛津RF-5301型荧光分光光度计2．试剂：10.0mg·mL-1奎宁储备液；0.05mol·L-1H2SO4溶液四、实验步骤1．系列标准溶液的配制

2、取6支25mL的容量瓶，分别加入0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL的10.0mg·mL-1奎宁标准溶液，用0.05mol·L-1H2SO4溶液稀释至刻度，摇匀。2.绘制荧光发射光谱和激发光谱(以1.2mg·mL-1的标准溶液找最大lem和lex)将lex固定在250nm,选择合适的实验条件,在350～600nm范围内扫描即得荧光发射光谱，从谱图中找出最大lem值；将lem固定在450nm,选择合适的实验条件，在220～400nm范围内扫描即得荧光激发光谱，从谱图中找出最大lex值。3．绘制标准曲线将激发波长lex固定在250nm处，荧光发射波长le

3、m固定在450nm左右处，在选定条件下，测量系列标准溶液的荧光强度，以荧光强度为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标作图，得到标准溶液的荧光强度标准曲线。4．未知样品的测定取约4mL待测样品，按照标准溶液相同的测定条件测定其荧光强度，扫描三次，从标准曲线上计算出对应的浓度。五、实验结果1．发射光谱和激发光谱的绘制以1.2mg·mL-1的标准溶液测定奎宁的发射光谱，固定激发波长为250nm，激发和发射狭缝分别设定为nm和nm，激发光谱扫描范围为350~600nm，得到奎宁的发射光谱，从图中可知其最大发射波长在nm左右。2固定发射波长在450nm，激发和发射狭缝分别设定为nm和nm，激

4、发光谱扫描范围为220~400nm，得到激发光谱，由图中可知奎宁共有两个激发波长，分别在nm和nm左右。2.系列标准溶液的荧光强度测定将激发波长固定在250nm，激发和发射狭缝分别设定为nm和nm，测定标准溶液在350~600nm范围内的发射光谱，从中读出450nm处对应的荧光发射强度，每个样品扫描三次，所得结果如下：样品浓度(mg·mL-1)荧光强度平均值平均偏差以荧光强度为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标作图，得到标准溶液的荧光强度标准曲线如下：其对应线性关系为：If=A+B·C(mg·mL-1)，其中A=,B=,R2=1．样品浓度测定未知样品浓度测定结果为：样品编号荧光强

5、度平均值平均偏差对应浓度(mg·mL-1)No.1No.2思考题：1．能用0.05mol·L-1HCl来代替0.05mol·L-1H2SO4稀释溶液吗？为什么？2．如何绘制激发光谱和荧光发射光谱？3．哪些因素可能会对奎宁荧光产生影响？2