分子荧光法测定罗丹明B的含量.doc

《分子荧光法测定罗丹明B的含量.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、教案（四）开课单位：化学及环境科学系课程名称：分析化学实验专业年级：2006级化学专业任课教师：分析化学课程组教材名称：分析化学实验2008-2009学年第1学期授课内容实验三分子荧光法测定罗丹明B的含量课时安排4学时教学目的要求1.掌握荧光法测定罗丹明B含量的基本原理。2.了解F-4500型分子荧光分光光度计的基本构造和原理，并能简单的操作。教学重点难点教学方法手段教学内容提纲课外学习要求预习下一实验。教学后记实验三分子荧光法测定罗丹明B的含量一、实验原理罗丹明B在水中是强的荧光物质，并且在低浓度

2、时，荧光强度与罗丹明B浓度呈正比：If=kc基此，测定一系列已知浓度的罗丹明B的荧光强度，然后以荧光强度对罗丹明B浓度作标准曲线，再测定未知浓度罗丹明B的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。图1罗丹明B的分子结构二、仪器与试剂1．仪器F-4500型分子荧光分光光度计；1000mL容量瓶2只，100mL的容量瓶12支，1mL的吸量管1支。2．试剂（1）1´10-2g×L-1的罗丹明B储备液：准确称取1.0000g罗丹明B，加用二次蒸馏水定容至100mL，将此溶液稀释100倍就得到10-4g×L-

3、1的罗丹明B标准溶液。三、实验步骤1．系列标准溶液的配制取11只100mL的容量瓶分别加入10-2g×L-1的罗丹明B储备液0，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50，0.60，0.70，0.80，0.90，1.00mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。2．绘制激发光谱和发射光谱在300~600nm范围内扫描激发光谱；在400~700nm范围内扫描荧光发射光谱。3．绘制标准曲线将激发波长固定在556nm，荧光发射波长固定在573nm处，测定系列标准溶液的荧光发射强度。4．未知试样的测定准确移取一

4、定量1´10-2g×L-1的罗丹明B标准溶液于100mL的容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，配制成未知样品。在标准系列溶液同样条件下，测定未知样品的荧光发射强度。5．绘制荧光强度If对罗丹明B溶液浓度c的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度。四、数据处理1.原始数据浓度（10-4mg×mL-1）0123456789x荧光强度扣除空白2.标准曲线绘制和未知样品含量计算。五、注意事项1.罗丹明B的浓度不要太高。2.实验结束后，检查仪器是否正常，关闭是否正确。六、思考题：1.为什么罗丹明B会发荧光？2.荧

5、光分光光度计有哪些部件组成？3.如何绘制激发光谱和荧光光谱？4.哪些因素可能会对罗丹明B荧光产生影响？