实验三荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量

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1、实验三荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量2012级检本四班樊朔卿2012222114实验目的和要求1.掌握荧光分光光度计的菽木结构及操作方法；2.了解荧光产生及测量的过程；3.掌握荧光分光法的定量分析方法（标准曲线法）：4.掌握影响荧光强度的因素。实验原理奎尼丁是抗疟疾奎宁的右旋体，属干生物碱类抗心律失常药物。主要用于阵发性心动过速，心房颤动，早搏；预防室性心动过速及对对房室结折返忡心动过速；还可预防冇症状的室上性和室性早拇。奎尼f的奋效血药浓度是3--6mg/L,8mg/L以上可发生严重不良反应。破酸奎尼丁的分子式力CW）•2"/），分子量力782.96,分子结构如图所示：

2、h3coK结构分为喹啉环和喹啉碱两个部分，根裾其喹啉环结构部分具冇产生災光的特性，采用荧光光度计测量其荧光强度，可实现硫酸奎尼丁含量的测定。实验仪器与试剂1.F93型荧光光度计；2.硫酸奎尼丁标准储备溶液（lOOug/ml）3.硫酸溶液（0.050mol/L）;4.硫酸籴尼丁标准样品溶液5.50ml容量瓶6个;6.5ml移液管2只7.1cm石英荧光比色皿1个实验步骤1.标准系列溶液及样品溶液配制:按照下表配制硫酸奎尼丁标准系列溶液及样品溶液编号123456（硫酸奎尼丁样品溶液）100ug/ml硫験奎尼丁标准溶液1.00ml2.00ml3.00ml4.OOul5.00ml

3、2.50ml说明以上溶液j用0.050m，匀用移'液管移取至50ml容量瓶中oVL硫酸溶液稀释至刻度幷揺匀系列标准溶液浓度2ug/ml4ug/ml6ug/ml8ug/mllOug/ml—1.荧光光谱的绘制将荧光波氐调节为365nm，用lcm石英災光比色皿，以5号溶液作为测定溶液，置于荧光光度计样品室中，盖上样unu室盖，调V荧光光度计灵敏度，使其最大荧光强度读数在100左右，然P按照下表依次调节災光波长，测定不同災光波长下5兮溶液的災光强度；在啤标纸上以测定的荧光强度为纵少林，荧光波长为横少标，绘制荧光光谱，丼在荧光光谱上找出最大荧光波长。激发波长360nm荧光波长38

4、0nm390nm400m410nm420nm430nm440nm450nm460nm荧光强度值2.67.621.941.362.275.683.380.971.5激发波长360nm劳光波长470nm480nm500nm510nm520nm530nm540nm550nm560nm荧光逄度值62.75531.921.914.89.35.53.32.1选择的最大焚光长为：^-=440（nm）荧光光谱908070605040302010-0400450500芙光波长（nm）5503506002.标准曲线制作激发波忪和灵敏度保持不变，荧光波长为入，用1cm石英荧光比色皿，装入0.

5、050mol/L硫酸溶液，置于災光光度计样品室中，盖上样品室舱盖，测量荧光强度，然后按照下表依次测定杯准系列溶液和样品溶液荧光强度，在华鉍纸上以荧光强度的T均值为纵华鉍，系列标准溶液的浓度为横叱标制阁，绘制标准曲线。编号123456（样品）硫酸溶液荧光强度FI20.136.351.867.383.323.30.5荧光强度E219.9365267.282.623.1F平均值2036.1551.967.2582.9523.2标准曲线■■y='7.85X+4.55F1201008060402002468101214系列标准溶液浓度（ug/ml）实验数据处理1.样品溶液中的溶液

6、奎尼丁含M计算根据6号样品溶液荧光强度测定的平均值，在标准曲线上采用作图法求出其对应的浓度值，采用下式计算样品溶液中硫酸奎尼丁的含量。50.00,,Cx=C读取值xw=2.376ug/ml实验注意事项1.测定系列标准溶液和样品溶液吋，必须使用同一只比色皿。2.比色皿放入荧光光度计样品室前，必须川吸水纸将外表面擦拭千净。3.比色IIIL在换装不

7、uj浓度溶液时，必须用待测溶液涧洗至少三次。4.在比色皿未放入災光光度计测定光路时，必须将样品室舱盖打开。讨论及思考1.调零是为了消除溶剂中离子发荧光而十扰实验结果，不调零亦吋。2.如果不调零，对实验结果无影响，因为调零后要在以r

8、;的测:ft过程屮均减基础荧光强度值，以抵消背景吸收。3.实验第二步中，调竹荧光光度计灵敏度时，要使其最大荧光强度读数在100左A，且此值不能人于150。4.激发光谱和荧光光谱都有吸收峰，伲足人部分物质的激发光谱接近365nm,而不同物质的荧光光谱最高峰不这是定性的依据。