细胞培养污染课件.ppt

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1、细胞培养污染CELLCULTURECONTAMINATION简介introduction凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染细胞污染不能完全被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性细胞污染的分类物理污染化学污染生物污染（支原体污染）提纲outline控制污染掌握良好的无菌操作技术建立细胞库合理应用抗生素保持工作区清洁建立良好的规章制度检测细胞污染温度孵箱放在温度较恒定的房间中培养液从冰箱取出后在室温放置放射线试剂周围不能放同位素振动孵箱周围不能放引起振动的设备辐射试剂不要放在带有玻璃门的冰箱中物理污染P

2、hysicalcontamination化学污染血清培养液及试剂水培养用器皿孵箱化学污染chemicalcontamination化学污染chemicalcontamination培养液及试剂选用纯度最高的试剂经过权威机构认定正确的储存方法血清新购买的血清用之前要试应选用同一批次的血清水用来配液和清洗容器传统用双蒸和三蒸水现在用纯水仪millipore超纯水放置过久纯度下降化学污染chemicalcontamination容器生产过程中有毒物质残留消毒剂和清洗剂的残留铝箔和包裹纸残留化学污染chemicalcontamination孵箱co

3、2混有有毒气体消毒剂和清洗剂的残留生物污染biologicalcontamination生物污染容易发现的生物污染包括细菌、霉菌和酵母不容易被发现的生物污染包括病毒、原虫、昆虫、支原体和其它细胞系生物污染biologicalcontamination对实验人员是一个潜在的危险因素细胞系交叉污染污染在这是个错误的用词难于发现若出现传代细胞的生长速度异常，考虑交叉污染同一时间只传同一种细胞每种细胞要有单独的液体建立细胞库每三个月更换一次细胞细菌、霉菌和酵母无抗生素污染易被发现抗生素存在易造成隐性污染隐性污染引起严重后果病毒最难发现和清除严格的宿

4、主性自限性支原体（杂草）生物污染biologicalcontamination污染严重难发现难去除显微镜看不到不引起培养液浑浊和PH改变营养要求高不容易用传统的微生物培养法检测到不能通过过滤清除大多数抗生素对其无效支原体检测方法生物污染biologicalcontamination方法敏感性优点缺点直接DNA染色(如Hoechst33258)低快速，便宜需要荧光显微镜结果不易解释指示细胞上间接DNA染色(如Vero)中放大污染结果易解释费时免疫荧光单克隆抗体易操作灵敏需要荧光显微镜肉汤和琼脂培养高灵敏慢需要专业解释ELISA中快速检查种类有

5、限PCR中-高特异性强快速需要PCR设备分子量对照2阴性对照3-8原有细胞的悬液9阳性对照分子量对照2阴性对照3-8新细胞的悬液9阳性对照VenorGeM试剂盒生物污染biologicalcontamination支原体树立“预防为主”的思想保证细胞来源干净确保基质和器材无菌严格无菌操作细胞培养时避免交谈操作结束时消毒台面每船15代的细胞应更换所有细胞培养材料丢弃前应高压消毒控制污染controlcontamination良好的无菌操作合理利用抗生素建立细胞库保持工作区清洁良好的规章制度细胞污染的检测良好的无菌操作所有玻璃器皿和培养液与试剂

6、的配制应严格无菌避免溢出、溅出和气溶胶；吸入或吸出液体时避免倾倒；吸入或吸出液体时，不要触碰细胞培养瓶的瓶口；液体应分装并置4-8oC保存；每种细胞应使用单独的液体；清洁区和污染区的材料应单独处理；控制污染controlcontamination合理利用抗生素过度依赖抗生素会使人们忽略无菌操作滥用抗生素常导致耐药菌的产生牢记抗生素不能代替无菌操作控制污染controlcontamination建立细胞库减少从主管单位获得细胞的运输费冻存的细胞生物性状不发生改变消除了隐蔽污染的潜在危害控制污染controlcontamination良好的规章

7、制度只有相关人员才可进入细胞培养区细胞培养区必须和其他区域分开每个细胞培养区应布局合理，保证所需物品就近放置，在处理细胞时避免不必要的走动细胞培养区应避免使用水池，从而避免微生物污染控制污染controlcontamination控制污染controlcontamination保持工作区清洁常规清洗地面和台面CO2孵箱每2-3个月消毒清洗孵箱所有溅出或溢出的液滴应立即擦拭并消毒每周孵箱内水盘需彻底消毒清洗定期清洁水浴箱生物安全柜每次使用后应清洁和消毒安全柜的内表面定期消毒安全柜工作面下层的盘子；及时清理废弃物，高压感染材料控制污染contr

8、olcontamination细胞污染的检测支原体的检测其它生物污染的检测使用传统的微生物学检测方法化学污染的检测常被误认为生物污染要靠逐一替换的方法确定化学污染的来源