ELISA实验操作流程--技术部.doc

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1、前期准备工作：实验前样本和试剂盒室温平行1小时，如果样本是冻存样本，应提前拿到2-8摄氏度进行解冻（不建议直接室温解冻）准备好实验所需耗材，蒸馏水（去离子水）。操作流程描叙：1，将要进行实验的版孔进行设定好，标准品5个点，每个点设定平行，需要用到10个孔，空白只需1个孔。剩下孔可以做为样本孔2，稀释标准，准备好5个EP管，然后在每个EP管中加入150微升标准稀释液，编上编码，分别为1，2，3，4,5，在1号管中加入150标准品，用枪头反复吹打10次左右（注意控制幅度不要过大容易产生气泡）如果有涡旋仪可以在涡

2、旋仪上涡旋5秒左右，然后换枪头，在1号管中取150微升加入到2号管，后面过程一次类推。最后稀释完，前面4个管中每管液体在150微升，5号管为300微升。浓度是从大到小。3，标准、样本、空白加样：标准是每个浓度点2个孔（做平行），每孔加入50微升，加样过程中注意换枪头，样本孔中每孔加入50微升，加样过程中注意换枪头，空白孔加入50微升蒸馏水。特别要说明的是，标准加样和样本加样尽量控制在15分钟内加完，如果时间拖的太长，会导致前面孔先反应后面孔才开始反应，这样数值偏差过大。加完样后盖上封板膜，至37摄氏度孵育3

3、0分钟.4，洗版，在孵育过程中可以将洗涤液配好，20ml30倍浓缩洗涤液用蒸馏水或者去离子水定容到600ml即可。每孔加入250-300微升的洗涤液（不要漫过版孔），（如果有震荡仪的话，可以讲板子放入震荡仪上5秒左右，然后静止三十秒，没有请忽略次过程）将板子在桌子上晃动5秒左右，然后静置30秒，甩干，拍板。说明：甩干过程尽量要快，1秒内就可以完成，不要慢慢倾斜倒掉液体，直接翻板甩掉液体即可。拍板过程需要在桌子上垫一层吸水纸或者滤纸，版孔朝下拍几下，拍干区别主要看吸水纸和滤纸上没有明显的水渍为完成。5，每孔加

4、入50微升的酶标试剂，此处在空白孔中不需要加（空白孔为空），孵育30分钟。6，洗版同步骤47，显色，先每孔中加入50微升的显色A液，然后每孔中加入50微升显色B液。避光37摄氏度显色15分钟8，终止，每孔加入50微升的终止液，注意，加完终止液必须在15分钟内读数，超过时间读数无效。在规定时间内读数都是有效的。至此，整个实验结束需要额外提醒的是：在做完整个实验过仪器之前，仪器最好预热半小时，这个计算好时间，也可以直接将仪器一直开着，直到整个实验结束。在加液过程中不要使枪头触及到板子底部，一般枪头都悬空，可以将

5、枪头靠在孔边缘，但枪头尖悬空，如果枪头上残留液体看整体多少量，不要吹打下去。特别忌讳在版孔内壁流向版孔。整个加液过程不要产生气泡。（洗涤液除外）