HIV抗体ELISA实验操作规程.doc

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1、HIV抗体ELISA实验操作规程HIV(1/2)抗体检测ELISA双抗原夹心法（丽珠试剂）1.目的：初步筛查HIV感染。2.原理：用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗原（合成肽或基因重组蛋白）包被微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其他试剂组成，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中的HIV-1/HIV-2抗体。3.材料：HIV(1/2)抗体诊断试剂盒（珠海丽珠，国药准字S20020011）、注射器、试管、离心机、加样器、吸嘴。4.操作步骤：4.1 抽取患者静脉血2ml，注入试管中。4.2 2500rpm/min离心10分钟，分离血清

2、。4.3 将试剂盒平衡至室温，取出所需的条板，余下的即时封存。4.4 将所需数量的条板固定于支架，按顺序编号，设置样品孔、空白对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔（空白对照1孔、阳性对照2孔、阴性对照3孔）用40-200ul规格的加样器在样品孔中加入50μl待测样品，空白孔不加任何液体，阴性、阳性对照孔分别加入50μl阴性或阳性对照，轻拍混匀。4.5 置37℃湿盒温育30分钟。4.6 将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6次，扣干。（注：洗涤时各孔要加满洗液，每次有1分钟的浸泡时间。）4.7 每孔加入50ul酶标记物(空白孔除外)，轻拍混匀。4.8 

3、置37℃湿盒温育30分钟。4.9 将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6次，扣干。（注：洗涤时各孔要加满洗液，每次有1分钟的浸泡时间。）4.10每孔加入50ul底物缓冲液和50ul底物液,轻拍混匀置37℃湿盒温育30分钟。4.11每孔加入50ul终止液，轻拍混匀。4.12用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔A值。5.结果判断5.1 临界值(Cutoff)=0.15+阴性对照平均A值。5.2 阳性：样品的A值≥Cutoff值。5.3 阴性：样品的A值＜Cutoff值。6.注意事项6.1 正常时，阴性对照的A值应<0.12，阳

4、性对照的A值应≥0.8，阴性对照的A值若<0.08以0.08计算。6.2 若阳性对照A值孔间之差大于30%，应重复试验。6.3 做好个人防护，患者标本须消毒处理。7.临床意义HIV(1/2)抗体诊断试剂盒适合批量检测的需要。