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1、苯甲酸、山梨酸的测定实训标准14.1任务工单14.1.1实训目的（1）掌握苯甲酸、山梨酸的测定的基本原理；（2）学习色谱分析法。14.1.2实训材料乳粉样品14.1.3实训仪器及工作条件（1）高效液相色谱(HPLC)仪、分析天平、超声波水浴、滤膜:0.45um（2）色谱条件：色谱柱:C18,250mtm×46mm,5um、流动相:甲醇一磷酸盐缓冲溶液=1+4,045μm滤膜过滤、流速:1.2mL/min、检测波长:227nm、柱温:室温、进样量:20uL14.1.4实训试剂（1）甲醇(CH3OH):色谱纯（2）亚铁氰化钾溶液(92g/L):称取亚铁氰化钾[k
2、4FeCN)6•3H2O]106g,用水溶解于1000mL容量瓶中,定容到刻度后混匀。（3）乙酸锌溶液(183g/L):称取乙酸锌[Zn(CH3COO)2•2H2O]219g,加入32mL乙酸,用水溶解于1000mL容量瓶中,定容到刻度后混匀。（4）磷酸盐缓冲液(pH=6.7):分别称取2.5g磷酸二氢钾(KH2PO4)和2.5g磷酸氢二钾(K2HPO4•3H2O)于1000mL容量瓶中,用水定容到刻度后混匀,用滤膜过滤后备用。（5）氢氧化钠溶液(0.1mol/L):称量4g氢氧化钠(NaOH),用水溶解于1000mL容量瓶中,定容到刻度后混匀。（6）硫酸溶
3、液(0.5mo1/L):移取30mL的浓硫酸(H2SO4)到500mL水中边搅拌边缓慢加入,冷却到室温后转移到1000mL容量瓶,定容到刻度后混匀。（7）甲醇水溶液:体积分数为50%。（8）苯甲酸和山梨酸标准贮备液:每毫升含苯甲酸、山梨酸各500ug。准确称取苯甲酸、山梨酸标准品各5.0mg,分别置于100mL容量瓶中,用甲醇溶解,并稀释至刻度。摇匀后,冷臧于冰箱中,有效期2个月。（9）苯甲酸和山梨酸的混合标准工作液:每毫升含苯甲酸、山梨酸各10g分别吸取苯甲酸和山梨酸的标准贮备液各5mL,至25mL的容量瓶中,用甲醇水溶液定容至刻度后混匀。冷藏于冰箱中,有
4、效期5d。14.2项目指导书14.2.1实训原理山梨酸、苯甲酸是国际粮农组织和卫生组织推荐的高效安全的防腐保鲜剂，广泛应用于食品、饮料、烟草、农药、化妆品等行业。食品中添加的山梨酸、苯甲酸若超标严重,在一定程度上会抑制骨骼生长,危害肾、肝脏的健康。根据FDA的规定,苯甲酸在食品中的使用量为0.2~1.0g/kg。但婴幼儿乳制品中不允许添加。嬰幼儿长期摄入苯甲酸也可能带来喘、荨麻疹、代谢性酸中毒等不良反应。但是现在一些婴幼儿奶粉中检测出了山梨酸和苯甲酸含量本实验根据《食品安全国家标准一乳品中山梨酸和苯甲酸的測定》中提供的方法进行分析測定。去除试样中的脂肪和蛋白
5、质,甲醇稀释,过滤后,采用反相液相色谱法分离測定。14.2.2实训步骤（1）试样处理1液态试样：贮臧在冰箱中的乳与乳制品,应在试验前预先取出,并达室温,称量20g(精确至0.01g)样品于100mL容量瓶中2固态试样称量3g(精确至0.01g)样品于100mL容量瓶中,加10mL水(40℃左右),用玻璃棒搅拌至完全溶解。（2）萃取和净化向盛有试样的容量瓶中加入25mL氢氧化钠溶液,混合后置于超声波水浴或70℃水浴中处理15min。冷却后,用硫酸溶液(约2mL左右)将pH调节到8(用pH计或pH试纸均可),然后加入2mL亚铁氰化钾溶液和2mL乙酸锌溶液。剧烈振
6、摇,静置15min,混合后冷却到室温,再用甲醇定容,静置15min,上清液经过滤膜过滤。收集滤液作为试样溶液,用于高效液相色谱仪測定。（3）测定吸取试样溶液和苯甲酸和山梨酸的混合标准工作液,注入色谱仪进行分析。以色谱峰面积定量。（4）分析结果计算试样中苯甲酸、山梨酸的含量按下式计算14.2.3课后作业（1）完成实训报告（2）本次实训所用到的试剂有哪些？分别如何配制？（3）列出此次实训的注意事项。（4）将实验结果拍照上传到班级群。14.3项目考核方案实训考核内容及评价方法考核内容考核方式权重分值第一组第二组…实训前有无预习教师评价10配制溶液的试剂用好是否放回
7、原处学生互评10实训过程是否认真教师评价10使用实验仪器是否正确规范教师评价10是否及时记录实训情况教师评价10仪器有无损坏学生互评10实训现象是否明显学生互评10仪器是否归位教师评价10桌面清理是否整洁教师评价10实训报告和作业完成情况教师评价10总计
