色谱分析法概述分析化学课件.ppt

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1、色谱分析法概述广西医科大学药物分析教研室8/5/20211色谱法chromatogrphy是一种重要的分离、分析技术混合试样→分离→单组分→检测→定性、定量分析8/5/20212色谱法的创始人－俄国植物学家茨维特(M.Tswett)1903年３月２１日在华沙自然科学学会生物学会上，他宣读了论文：Onanewcategoryofadsrptionphenomenaandtheirapplicationtobichemicalanalysis.３年后，命名此法为chramatography，２０多年后才得到应用．8/5/202

2、13色谱法的由来在茨维特的实中：装有CaCO3的玻璃管——色谱柱CaCO3——固定相纯石油醚——流动相8/5/20214色谱法的由来在该实验中，碳酸钙上混合色素被分成不同色带的现象，像一束光线通过棱镜时被分成不同色带的光谱现象一样，因此茨维特把这种现象称为色谱，相应的分离方法称为色谱法（色层法，层析法）色带8/5/202158/5/20216Tiselius,A.W.K.Martin,A.J.P.Synge,R.L.M.1948年Nobel化学奖1952年Nobel化学奖吸附色谱与电泳分配色谱8/5/20217色谱法是一种

3、分离技术;试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。其中的一相固定不动，称为固定相;另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体(气体或液体)，称为流动相。1、色谱法的定义色谱法定义：利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如溶解性、吸附力、分子形状及大小、极性、分配系数等）而使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的。8/5/202182、色谱法的特点(1)分离效率高复杂混合物，同系物、异构体、手性异构体。(2)灵敏度高可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)

4、级的物质量。(3)分析速度快一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。(4)应用范围广(5)不足之处：被分离组分的定性较为困难。需要与其他分析方法联用(GC-MS,LC-MS8/5/202191931年库恩奥地利化学家胡萝卜素植物色素分离20世纪30年代离子交换色谱建立1940年吸附色谱与电泳相结合1941年分配色谱创立1952年气相色谱法建立1968年高效液相色谱法建立1975年之后离子色谱、超临界流体色谱、高效毛细管电泳、场流动分级分离8/5/202110Tiselius,A.W.K.Martin,A.J.P.S

5、ynge,R.L.M.1948年Nobel化学奖1952年Nobel化学奖吸附色谱与电泳分配色谱8/5/202111色谱法的特点优点：“三高”、“一快”、“一广”缺点：高选择性——可将性质相似的组分分开高效能——反复多次利用组分性质的差异产生很好分离效果高灵敏度——10-11~10-13g，适于痕量分析分析速度快——几~几十分钟完成分离一次可以测多种样品应用范围广——气体，液体、固体物质化学衍生化再色谱分离、分析对未知物分析的定性专属性差需要与其他分析方法联用(GC-MS,LC-MS)8/5/202112第一节　色谱过程的

6、基本原理一、色谱过程二、色谱流出曲线和有关概念三、分配色谱与色谱分离8/5/2021131.互不相溶的两相（流动相、固定相）；2.被分离组分在两相之间作相对运动一、色谱过程8/5/202114色谱分离过程实验色谱柱色谱混合物固定相流动相色谱分离8/5/202115色谱法实质是分离分离依据：各组分在两相之间作用力不同　(吸附能力　分配系数　离子交换能力大小排阻能力　其他亲合作用)各组分差速异行→分离一、色谱过程8/5/202116填充柱分配色谱分离过程一、色谱过程以吸附色谱为例吸附→解吸→再吸附→再解吸→反复多次洗脱→被测组

7、分分配系数不同→差速迁移→分离8/5/202117A与B两组分在色谱柱内：吸附→解吸→再吸附→再解吸······向下移动。由于A、B二组分存在着理化性质的差异，因而吸附剂对它们的吸附能力不同，在柱中随流动相迁移的速度也就不同。经一段时间后，两组分就可以彼此分离。如果吸附剂对A吸附能力弱则A易被流动相洗脱结果A先流出色谱柱。8/5/202118差速迁移固定相对被分离各组分有不同的吸附（or溶解）能力，而各组分在流动相中又有不同的溶解度，导致它们在柱内的移动速度不同．由（开始）本来只有微小差异的各组分，通过成千上万次

8、的吸附（溶解）　解吸（分配），各微小差异累加起来，最终达到各组分的完全分离．一、色谱过程8/5/202119第一节　色谱过程的基本原理一、色谱过程二、色谱流出曲线和有关概念三、分配色谱与色谱分离8/5/202120二、色谱流出曲线和有关概念色谱流出曲线和色谱峰色谱流出曲线基线色谱峰对称因子8/5/202