淀粉酶含量测定.doc

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1、淀粉酶(AMS)测定试剂盒说明书(碘-淀粉比色法)一、原理：淀粉酶能水解淀粉生成葡萄糖、麦芽糖及糊精，在底物浓度已知并且过量的情况下，家人碘液与未水解的淀粉结合生成蓝色复合物，根据蓝色的深浅可推算出水解的淀粉量，从而计算出AMS的活力。二、试剂组成与配制：（100T）1、0.4mg/ml底物缓冲液：60ml×1瓶，4℃冰箱保存6个月。2、0.1mol/L碘贮备液：7ml×1瓶，4℃避光保存6个月。0.01mol/L碘应用液的配制：将碘贮备液：蒸馏水=1:9稀释，现用现配4℃避光保存。三、操作表：测定管（u管）空白管（0管）底物缓冲液（ml）37℃预温5分钟0.50.5待测样本（ml）0.1混

2、匀，37℃水浴，准确反应7.5分钟碘应用液（ml）0.50.5蒸馏水（ml）3.03.1混匀，660nm波长，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度。*注：不同样本批量测试前需要做预实验，确定最佳取样浓度，将（空白OD-测定OD控制在0.05～0.150之间）四、计算：1、单位定义：100ml血清（浆）中的AMS，在37℃与底物作用30分钟，水解10mg淀粉为1个单位。2、公式：（此公式适用于测定血清中淀粉酶）血清淀粉酶的含量测定一、实验准备：1、实验器材：移液枪（100~1000ul、10~100ul、1000~5000ul、2~20ul）、5mlEP管、0.5mlEP管、比色皿、100ml

3、烧杯、漩涡仪、水浴箱，分光光度计、计时器。2、实验药品：NaCl、蒸馏水、0.4mg/ml底物缓冲液、0.1mol/L碘贮备液。二、实验步骤：1、0.01mol/L碘应用液的配制：将碘贮备液：蒸馏水=1:9稀释，现用现配4℃避光保存。2、生理盐水的配置：称取9gNaCl置100ml烧杯，加入100ml蒸馏水，溶解即得。3、样品最佳取样浓度摸索：取待测血清用生理盐水稀释成不同比例（2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍、128倍、256倍等倍数进行稀释），取0.1ml进行检测。取两个5mlEP管，标记为空白、血清所稀释的倍数，分别加入底物缓冲液0.5ml，其中带有倍数的EP管加入相应的稀释好

4、的血清0.1ml，于漩涡仪上混匀，同时放入37℃水浴箱反应7.5分钟，取出后各加入0.5ml0.01mol/L碘应用液，空白管加入3.1ml蒸馏水，带有倍数的EP管加入3.1ml蒸馏水，混匀，蒸馏水调零，迅速于660nm波长测定吸光度，控制空白OD-测定OD在0.05~0.150之间。4、样品测定：将所需测定样品按摸索确定的倍数稀释，同法测定吸光度，记录数据。5、数据处理：按给定公式计算待测血清淀粉酶含量。注：加入碘应用液后不能长时间放置，否则碘见光分解后影响测定结果