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1、淀粉酶活力的测定方法萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定实验报告萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定一、研究背景及目的酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂。大多数由蛋白质组成（少数为RNA）O能在机体中十分温和的条件下,高效率地催化各种生物化学反应，促进生物体的新陈代谢。生命活动中的消化、吸收.呼吸.运动和生殖都是酶促反应过程。酶是细胞赖以生存的基础。细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。因此，对酶的研究是十分重要的。通过对酶活性的测定，可以更好地了解生物体的代谢过程。其中，淀粉
2、酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，可以分成a-淀粉酶，卩•淀粉酶等。a•淀粉酶既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，无差别地随机切断糖链内部的«-1,4•链。P-淀粉酶与a•淀粉酶的不同点在于从非还原性末端逐次以麦芽糖为单位切断弘1,4■葡聚糖链。根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为：每分钟每克鲜重麦种所催化产生的麦芽糖毫克数。3,5—二硝基水杨酸法是一种对还原糖定量测定的方法。还原糖和碱性二硝基水杨酸试剂一起共热，产生一种棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正
3、比。因此，我们可以测定样品中还原糖以及总糖的量。麦芽糖是还原性糖，可用该方法对其含量进行测定。本次实验的目的在于通过实验过程，理解淀粉酶测定的原理，熟悉实验操作，掌握实验方法。蛋白质是生物体中广泛存在的一类生物大分子，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质，对生物来说十分重要。目前有四种蛋白质含量测定方法：凯氏定氮、Folin■酚法.染料结合法.紫外法，最常用的是后三种。本次实验选择通过Folim酚法测定蛋白质含量。这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的
4、配制较为困难,二.实验原理该实验的总体思路为精确控制酶促反应的条件，保持其处于最适条件，测定酶促反应的初速度来表示酶的活力。以及通过化学反应使得蛋白质具有特异光吸收，再通过比色法测定蛋白质含量。该实验的理论基础为:(1)酶的性质：淀粉酶是蛋白质，在一定的条件下会发生钝化，可利用此性质将体系中的非目标酶类钝化，从而测出目标酶类的活力；(2)3,5—二硝基水杨酸法：3,5—二硝基水杨酸法是一种对还原糖定量测定的方法。还原糖和碱性二硝基水杨酸试剂一起共热，产生一种棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范冃内，棕红色物质颜色
5、的深浅程度与还原糖的量成正比。因此,我们可以测定样品中还原糖以及总糖的量。麦芽糖是还原性糖，可用该方法对其含量进行测定。具体反映为：在加热.碱性条件下：3,5—二硝基水杨酸（黄色）+还原糖》3■氨基5硝基水杨酸（棕红色）+糖酸;（3）比色法原理：朗伯—比尔定律（当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时，与其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比）。二.仪器试剂1、仪器设备：上海精宏实验设备有限公司DK-S24型40°C水浴锅;天津市中环实验电炉有限公司22列八孔型70°C电热恒温水浴锅；上海安
6、亭科学仪器厂TDL-408型低速离心机；上海精密科学仪器有限公司722型光栅分光光度计;DCL-2000DY型电磁炉（佛山市爱庭电器有限公司）。2、主要实验器皿：50ml容量瓶，100ml容量瓶，研钵一套,具塞刻度试管若干，试管若干，烧杯。3、试剂:（1）麦芽糖标准液（lmg/ml）；（2）pH5.6的柠檬缓冲液:A液（称取柠檬酸20.01克，溶解后定容至1L）B液（称取柠檬酸钠29.41克，溶解后定容至1L）取A液5.5mkB液14.5ml混匀即为pH5・5柠檬酸缓冲液;（3）3,5■二硝基水杨酸溶液（称取3
7、,5•二硝基水杨酸1.00克，溶于20ml1M氢氧化钠中，加入50ml蒸馅水，再加入30克酒石酸钠，待溶解后，用蒸馅水稀释至100ml,盖紧瓶塞，勿使二氧化碳进入）;（4）麦芽糖标准液（称取0.100克麦芽糖，溶于少量蒸馅水中，小心移入100ml容量瓶中，用蒸馅水定容到100ml）；(5)0.4MNaOH；(6)试剂甲:(A)10克Na2CO3,2克NaOH和0.25克酒石酸钾钠(KNaC4H4O6-4H2O)o溶解于500毫升蒸馅水中。(B)0.5克硫酸铜(CuSO4-5H2O)溶解于100毫升蒸馅水中，每次
8、使用前，将50份(A)与1份(B)混合，即为试剂甲。(7)试剂乙:在2升磨口回流瓶中，加入100克铸酸钠(Na2WO4-2H2O),25克钮酸钠(Na2MoO4・2H2O)及700毫升蒸馅水，再加50毫升85%磷酸,100毫升浓盐酸，充分混合，接上回流管，以小火回流10小时，回流结束时,加入150克硫酸锂(Li2SO4),50毫升蒸馅水及数滴液体漠，开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的
