测定α-淀粉酶活力的方法

测定α-淀粉酶活力的方法

ID:12870752

大小:42.50 KB

页数:5页

时间:2018-07-19

测定α-淀粉酶活力的方法_第1页
测定α-淀粉酶活力的方法_第2页
测定α-淀粉酶活力的方法_第3页
测定α-淀粉酶活力的方法_第4页
测定α-淀粉酶活力的方法_第5页
资源描述:

《测定α-淀粉酶活力的方法》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库

1、实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识,了解测定α-淀粉酶活力的方法。二、实验原理酶是生物体内具有催化作用的蛋白质,通常称为生物催化剂。酶催化的反应称为酶促反应。生物催化剂催化生化反应时具有:催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基,辅酶,金属离子有关等特点。能提高酶活力的物质,称为激活剂。激活剂对酶的作用有一定的选择性,其种类多为无机离子和简单的有机化合物。使酶的活力中心的化学性质发生变化,导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。氯离子为唾液淀粉

2、酶的激活剂,铜离子为其抑制剂。应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的,有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂,而在高浓度时则为该酶的抑制剂。如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。酶促反应中,反应速度达到最大值时的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。温度对酶反应的影响是双重的:一方面随着温度的增加,反应速度也增加,直至最大反应速度为止;另一方面随着温度的不断升高,而使酶逐步变性从而使反应速度降低。同样,反应中某一PH范围内酶活力可达最高,在最适PH的两侧活性骤然下降,其变化趋势呈钟形曲线变化。食品级α-

3、淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂,主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉等微生物产生。但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度,以及产物的性质等均有差异。α-淀粉酶属水解酶,作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键,迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖,使淀粉的粘度迅速下降,淀粉与碘的反应逐渐消失,这种作用称为液化作用,生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键,因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖

4、。本实验通过淀粉遇碘显蓝色,糊精按其分子量的大小遇碘显紫蓝、紫红、红棕色,较小的糊精(少于6个葡萄糖单位)遇碘不显色的呈色反应,来追踪α-淀粉酶作用于淀粉基质的水解过程,从而了解酶的性质以及动力学参数。三、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活力的影响(一)试剂及材料1、1:30唾液淀粉酶配置用蒸馏水漱口,1min后收集唾液,以1:30倍蒸馏水稀释。2、0.2%可溶性淀粉称取可溶性淀粉0.2g,预加20mL蒸馏水调匀,然后倒入80mL沸水中,继续煮沸至溶液透明,冷却后补水至100mL。3、1%NaCl溶液称取1.0g氯化钠,加

5、水溶解稀释至100mL。4、1%CuSO4溶液称取1.0g硫酸铜,加水溶解稀释至100mL。5、标准稀碘液称取11g碘,22g碘化钾,置研钵中,加入适量的水研磨至碘完全溶解,并加水稀释定容至500mL。吸取2mL上述碘液,加入10g碘化钾,用水稀释至500mL。(二)仪器设备电热恒温水浴锅。(三)操作方法取试管3根,编号后按下表配置实验样液。试管序号0.2%可溶性淀粉1%NaCl1%CuSO4蒸馏水混匀,放入37℃水浴中保温10min。立即加入唾液淀粉酶。1:30唾液淀粉酶12.0mL1.0mL//1.0mL22.0

6、mL/1.0mL/1.0mL32.0mL//1.0mL1.0mL用点滴管并不断从试管中吸取样液于比色白瓷板,用稀碘液检验试管内淀粉被淀粉酶水解的程度,记录各试管内样液遇碘不显蓝色的先后顺序,解释实验现象的原因。四、温度与PH值对α-液化淀粉酶活力的影响(一)试剂与材料1、2%可溶性淀粉溶液称取可溶性淀粉2.0g(预先在105℃烘干),预加20mL蒸馏水调匀,然后倾入80mL沸水中煮沸至溶液透明,冷却后定容至100mL。2、PH4.0、5.0、6.0、7.0、8.0磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲溶液(1)0.2mol/mLNa

7、2HPO4称取35.60gNa2HPO4.2H2O,用水溶解定容至100mL。(2)使用酸度计,用柠檬酸调整至所需的PH值。3、供试酶液的制备称取固体α-液化淀粉酶1.00g,加入PH6.0磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲溶液100mL(缓冲液的加入量视酶活力大小而定,控制酶解反应在5-10min内完成),于40℃恒温水浴中活化0.5小时,然后用3000rpm/min离心机离心分离5min,酶提取液于冰箱保存,供试验用。4、标准比色液甲液:称取氯化钴(CoCl.6H2O)40.2439g、干燥重铬酸钾0.4748g,溶解并定容

8、至500mL。乙液:称取铬黑T40.00mg,溶解并定容至100mL。使用时取甲液40.0mL、乙液5.0mL,混合。混合比色液宜放置冰箱保存,使用7天后重新配置。5、标准稀碘液。(二)仪器设备电热恒温水浴锅。(三)操作方法1、用滴管吸取一定量标准比色液于白色瓷比色板空穴中,作为判断酶解反应终点的标准色。2、不同温度对α-液化淀粉酶活力的影响取

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。