苹果中多酚类物质HPLC检测方法的建立_李学鹏.pdf

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1、DOI:10.16429/j.1009-7848.2008.06.018第8卷第6期中国食品学报Vol．8No．62008年12月JournalofChineseInstituteofFoodScienceandTechnologyDec．2008苹果中多酚类物质HPLC检测方法的建立112李学鹏励建荣杨建荣（1浙江工商大学食品与生物工程学院浙江省食品安全重点实验室杭州3100352烟台大学食品科学与工程研究所山东烟台264005）摘要以小国光苹果为试材，建立苹果中多酚类物质的测定方法。通过对色谱条件的摸索和优

2、化，确定以反相C18柱为固定相，以2mmol/L磷酸缓冲液和甲醇为流动相梯度洗脱分离中性酚，以80%甲醇-20%水为流动相分离酸性酚，建立苹果多酚类物质HPLC测定方法；根据食用习惯将苹果果实分为果皮、果核、果肉3个部分，用乙酸乙酯提取干粉中的酚类物质，在pH2.0条件下分离提取酸性酚，在pH7.0下分离提取中性酚，分析小国光苹果不同部位的多酚类物质含量。结果显示：各物质分离效果较好；经方法学验证，各物质线性关系良好，回收率在86.6%～101.8%之间，精密度、稳定性、重复性RSD均小于10%；苹果中不同部位

3、的多酚类物质的种类和含量各不相同。该方法的灵敏度高，准确性和重现性良好。关键词苹果多酚类物质高效液相色谱法文章编号1009-7848（2008）06-0116-06多酚类物质是具有苯环并结合有多个羟基化法学考察。在此基础上还分析了市售小国光苹果学结构的物质总称，包括黄酮类、单宁类、酚酸类不同部位的多酚类物质含量，以期为苹果多酚的以及花色苷类等。一般作为生长代谢中的次生产开发利用以及苹果产品质量控制提供基础数据。物，广泛存在于植物的组织中，对植物的生长发育和调节、基因的诱导表达、信号转导、紫外辐射的1材料和方法[

4、1]吸收、生物固氮以及果蔬加工过程中风味的形1.1材料[2][3～5]成、颜色变化（如褐变）、果蔬饮料的混浊与沉1.1.1标准品与样品绿原酸标准品，购于Sig-[6～7]淀等都有一定的影响。苹果多酚包括多种酚类ma公司；（+）-儿茶素、（-）-表儿茶素、槲皮素、芦物质。根据酚类的酸碱性可分为酸性酚类（主要是丁、根皮苷标准品，均购于中国药品生物制品检定绿原酸和咖啡酸）和黄酮类化合物（又称中性酚所。小国光苹果，市售。[8～9]类，如儿茶素、表儿茶素、原花青素等）。苹果多1.1.2试剂甲醇，色谱纯；磷酸、乙酸乙酯、盐

5、酸酚的检测是以多酚的各种化学反应为基础，使用和氢氧化钠均为分析纯。各种仪器进行分析。可采用正丁醇－盐酸水解法、1.1.3仪器Agilent1100系列高效液相色谱仪、香兰素法、Folin－Denis（FD）法、Folin－Ciocalteu（FC）Agilent1100化学工作站、VWD检测器、ZORBAX[10]法、HPLC法、UV法等方法测定。采用HPLC法SBC18柱（150mm×4.6mm，5μm）、冷冻干燥机、测定苹果多酚国内外已有报道，但现有方法大多多用植物粉碎机、旋转蒸发器、真空包装机。以甲醇和水

6、、甲醇和甲酸水溶液、冰醋酸和乙腈等1.2方法为流动相，对多个酚类物质的分离效果不够理想。1.2.1样品前处理将苹果洗净、晾干，用水果刀本文通过对色谱条件的摸索和优化，建立了苹果将果皮、果肉、果核分割、切碎。冷冻干燥后用植物多酚类物质的HPLC测定方法，并做了全面的方粉碎机粉碎成粉状，过100目筛，真空包装，备用。1.2.2多酚类物质的提取分别称取苹果皮、肉、收稿日期：2007-12-28核干粉各5g，加入50mL蒸馏水和1mL6mol/L作者简介：李学鹏，男，1982年出生，硕士生HCl，用1mol/LHCl调

7、pH至2.0，然后加入50mL通讯作者：励建荣第8卷第6期苹果中多酚类物质HPLC检测方法的建立117乙酸乙酯，萃取2次，搅拌5min，离心，分离酯相RSD．和水相。将酯相真空浓缩至干，溶于10mL甲醇2.3.4稳定性的考察准确称取同一批苹果干粉中，用于HPLC测定（此为酸性酚）。水相用6mol/5g，按1.2.2节方法制得样品溶液，在室温下放置LNaOH调pH至7.0，再加入50mL乙酸乙酯萃0、2、4、6、8、12、24、48h，进行HPLC测定，计算各取2次，分离出酯相。将酯相真空浓缩至干，再用单酚峰面积

8、的RSD值。10mL甲醇定容，用于HPLC测定（此为中性酚）。2.3.5重复性的考察精密称取同一批苹果干粉5份，按照1.2.2节方法进行前处理，在已确定的2色谱条件的确定色谱条件下进行HPLC测定，计算各单酚含量的2.1色谱条件RSD值。通过全波长紫外扫描得到流动相和各单酚在2.3.6最低检测限的考察取最低浓度的标准品紫外光区的最大吸收波长。避开溶剂的吸收波长，混合溶液，用流动相进行倍