生物化学实验知识点整理.doc

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1、生物化学实验知识点整理实验一还原糖的测定、实验二粮食中总糖含量的测定1.还原糖测定的原理3,5-二硝基水杨酸与还原糖溶液共热后被还原成棕色的氨基化合物,在550nm处测定光的吸收增加量，得出该溶液的浓度，从而计算得到还原糖的含量2.总糖测定原理多糖为非还原糖，可用酸将多糖和寡糖水解成具有还原性的单糖，在利用还原糖的性质进行测定，这样就可以分别求出总糖和还原糖的含量3.电子天平使用4.冷凝回流的作用：使HCl冷凝回流至锥形瓶中，防止HCl挥发，从而降低HCl的浓度。5.多糖水解方法：加酸进行水解6.怎样检验淀粉都已经水解：加入1-2滴碘液，如果立即变蓝则说明没有完全水解，反之，则说明已

2、经完全水解。7.各支试管中溶液的浓度计算8.NaOH用量：9.不能中途换分光光度计,因为不同的分光光度计的光源发光强度不同10.分光光度计的原理：在通常情况下，原子处于基态，当通过基态原子的某辐射线所具有的能量（或频率）恰好符合该原子从基态跃迁到激发态所需的能量（或频率）时，该基态原子就会从入射辐射中吸收能量，产生原子吸收光谱。原子的能级是量子化的，所以原子对不同频率辐射的吸收也是有选择的。这种选择吸收的定量关系服从式。实验证明，在一定浓度范围内，物质的吸光度A与吸光样品的浓度c及厚度L的乘积成正比，这就是光的吸收定律，也称为郎伯-比尔定律分光光度计就是以郎伯比尔定律为原理，来测定浓

3、度11.为什么要水解多糖才能用DNS因为DNS只能与还原糖溶液在加热的条件下反应生成棕红色的氨基化合物，不能与没有还原性的多糖反应。12.为什么要乘以0.9因为淀粉的水解方程式为，只有用还原糖的含量乘以0.9才能得到多糖的含量。13.为什么要中和后再测？因为DNS要在中性或微碱性的环境下与葡萄糖反应实验三蛋白质的水解和纸色谱法分离氨基酸、实验四考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度1.纸色谱分离氨基酸分离原理由于各氨基酸在固定相（水）和流动相（有机溶剂）中的分配系数不同，从而移动速度不同，经过一段时间后，不同的氨基酸将存在于不同的部位，达到分离的目的。2.天然氨基酸为L型3.酸式水解的优点是：是

4、保持氨基酸的旋光性不变，原来是L型，水解后还是L型，由于甘氨酸所有的R基团是氢原子，所以它不是L型5.酵母粉水解后绝对不含有色氨酸6.根据分离原理不同分离色谱可分为：有吸附色谱、离子交换色谱、分配色谱等7.不同物质的Rf值不同，同种物质不同条件的Rf值不同吹分时不能吹的过热和过干，与滤纸结合太紧密。流动相带走不是很容易。容易出现拖尾8.喷完茚三酮后不能直接放入烘箱，先自然晾干再放入烘箱内，茚三酮乙醇高温易着火，烘箱的金属条过热也会显色。会出现拖尾或斑点状，样品显色后成条状，；酵母分解后不知有5个斑点，会有很多种，两种之间可能还有其它的氨基酸，9.茚三酮的反应方程式10.考马斯亮蓝测定

5、蛋白质浓度:范德瓦尔键通过分子间静电吸引力结合11.考马斯亮蓝分为G-250（反应速度快，不易洗脱，用定量测定）、R-250反应速度慢，易洗脱，通常用于定性测定12.考G-250与蛋白质结合后稳定时间为1h左右13.蛋白质的盐析反应蛋白质中加入某些饱和盐，蛋白质溶液中浓度下降，蛋白质析出14.蛋清：NaCl溶液=1：910%卵清蛋白实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳、实验六维生素C的定量测定1.醋酸纤维薄膜电泳的原理、影响迁移的因素血清中各种蛋白质离子在电场的作用下，向着与其电性相反的电极移动。由于各种蛋白质的等电点不同，从而在同一pH环境中所带电荷量有所不同，同时分子大小形状各有差异

6、，所以在统一电场中泳动速度不同。一般来说，所带的电荷多且颗粒小的，泳动速度快，反之则慢。2.影响电泳的因素：（1）粒子本身（电荷量、粒子大小、形状）（2）黏度（3）电场（4）电渗（5）支持物的筛口3.醋酸纤维薄膜的优点具有均一的泡沫样结构，厚度仅120微米，有强渗透性，对分子移动无阻力，作为区带电泳的支持物进行蛋白质电泳有简便、快速、样品用量少，应用范围广，分离清晰，没有吸附现象等优点。4.pH8.6中带负电，往阳极移动5.五条带的顺序：血清蛋白、球蛋白、球蛋白、球蛋白、球蛋白6.层析时，粗糙面朝上，电泳时粗糙面朝下，记号做在光泽面7.实验成败的关键P43-P458测定VC的原理：还

7、原型抗坏血酸能还原2，6-二氯酚靛酚染料，本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。因此，当染料滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化前，则滴下的染料立即变成无色。一旦溶液中的维生素C全部被氧化，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。9.1%草酸有何作用（1）提供一个显色环境（2）保护维生素C（3）作空白对照实验七蛋白质总氮含量的测定、实验八正交法测定几种因素对酶活性的影响1.凯氏定氮法的原理：含氮有机化合物在浓