Septin9基因甲基化检测操作说明.docx

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1、Septin9基因甲基化检测1.3.5ml血浆+3.5ml裂解液，涡旋混匀，RT静置10min。2.加入90ul混匀磁珠、2.5ml无水乙醇，颠倒混匀5-6次，10-20rpm旋转混匀40-50min。3.取下15ml离心管，置于磁力吸附架，弃上清。4.加入1.5ml洗液A，涡旋重悬磁珠，转移到2.0ml离心管，置于磁力吸附架上。5.吸附磁珠，弃上清；短暂离心，再次吸弃上清。6.加入100ul洗脱液，涡旋混匀，80℃1000rpm震荡10min。7.短暂离心，置于磁力吸附架，收集洗脱液至新的2.0ml离心管。（4℃可保存24h，不可冷冻）8.加入150ul亚硫酸盐溶液、25u

2、l保护液，涡旋混匀，80℃静置孵育40-50min。9.降温震荡仪至23℃；离心管中加入1000ul洗液A，20ul磁珠，涡旋混匀，23℃1000rpm震荡40-50min。10.短暂离心，置于磁力吸附架，弃上清。11.加入800ul洗液A，涡旋洗涤磁珠，离心吸附弃上清；12.加入800ul洗液B，涡旋洗涤磁珠，离心吸附弃上清；13.加入400ul洗液B，涡旋洗涤磁珠，离心吸附弃上清；14.再次离心吸附弃上清x2。15.室温干燥10min。16.加入60ul洗脱液，涡旋混匀，23℃1000rpm震荡10min。17.短暂离心，吸附。PCR反应液：每个反应配置32ulPCR反应

3、液+1.6ulTaq酶。