课题2 土壤中分解尿素的细菌分离与计数课件.ppt

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1、课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)2脲酶+CO22NH3+H2O课题背景课题目的：一、从土壤中分离出能够分解尿素的细菌二、统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌一.研究思路㈠.筛选菌株㈡.统计菌落数目㈢.设置对照1、如何从土壤中分离出能够分解尿素的细菌？土壤有“微生物的天然培养基”之称。同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。尤其

2、是在富含有机质的土壤中，有更多的微生物。而这些微生物中只有一小部分能够分解尿素。那么如何能从众多的微生物中筛选出能够分解尿素的细菌呢？㈠.筛选菌株资料一：思考：1、科学家为什么能从热泉中筛选出耐高温的Taq细菌？DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，而此项技术的实施必须使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。美国微生物学家托马斯·布鲁克于1966年在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了水生耐热细菌Taq，并从它体内分离出了耐高温的TaqDNA聚合酶。因为热泉温度为70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq

3、细菌被筛选出来。启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。2、从上述资料中你能得到什么启示？实验室中微生物的筛选，也是应用同样的原理：即人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。也就是利用选择培养基筛选出你想要的目的菌株。比如：不加氮源的培养基——固氮菌不加碳源的培养基——自养微生物加入高浓度食盐的培养基——金黄色葡萄球菌允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。以尿素为唯一氮源的培养基——能够分离尿素的细菌思考：什么样的培养基能选择培养

4、出能够分离尿素的细菌呢？15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：①从物理性质看此培养基属于哪类？固体培养基②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。5、培养基选择分解尿素的微生物的原理6、怎样证明此培养基具有选择

5、性呢？以尿素为唯一氮源的培养基牛肉膏蛋白胨培养基是分离尿素细菌判断该培养基有无选择性实验组对照组培养基类型是否接种目的结果只生长尿素细菌生长多种微生物是1、显微镜直接计数法——全部细菌数利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。㈡.统计菌落数目：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；缺点2.间接计数法（活菌计数法）⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。⑵常用方法：稀释涂布平板法。

6、每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。旁栏思考题1．想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？答案统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板上的菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是（）(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)A．2.34×108B．2.34×109C．234    D．23.4B注意事

7、项：①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板进行计数。②设置重复组：为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的培养皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。③设置对照组：将不加土样的培养基置于相同条件下进行培养，作为空白对照。④统计的菌落往往比活菌的实际数目低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。㈢.设置对照：讨论题1：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下

8、两种统计结果。1、第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。2、第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结