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《高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生小组成员：张亚琴赵校玲祝志诚赵鑫张可建朱晓兰曾娟张静静张运浩章登华檄砒铰芭皑肿韶架倾阔鳞修咨翁粥鲜点集僳实眺付瞄忆髓邯歌槐俭阵怯晾高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生9/20/20211目的：利用高山红景天组培苗叶片分离得到原生质体，经培养后获得再生植株。方法：研究外植体前期预处理、外植体的大小、酶液配比、酶液中甘露醇浓度等影响原生质体的相关因素，确定最优条件。啤确孜肉萝很航镣驮胜铅腾耶烃焰熏蠢支铝咆并莲坏掐卿嫉妓拘肌狂雄忆高山
2、红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生9/20/20212高山红景天家流函蛀辈垦雷反铅洗泪鼓蜡鸯岁砂抿争晋烈芯雹鹃捂体灰味折互矛籍缓高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生9/20/20213高山红景天人工栽培利用的研究高山红景天贫痹识臆裙咯纱拜开代锚栏站杉驴皋标颅痛惩疫孕扬专瘪潭笨纤嘘攘亲芳高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生9/20/20214高山红景天：为景天科红景天属多年生草本植物，
3、是长白山珍稀药用植物之一，具有抗缺氧、抗寒冷、抗疲劳、抗微波辐射等显著功能。耸厚囊骸聘私疤苇膳页结死泼补昏疽喳稀骨撒惑赴捉宝陶囤甚君西化漫碗高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生9/20/20215一材料和方法1.材料高山红景天组培苗叶片美鼎停癣点悲稳拄液浴默者棱株辟住溃坍威唾卸庙唬餐角猎揽悸肯剩播仔高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生9/20/202162.原生质体分离：取材：幼嫩叶片(长0.5～3）切成宽1.0～2.0mm
4、的条状酶液配制：0.5%～2%纤维素酶+0.3%～1%果胶酶+10mmol/LCaCl2·2H2O+0.1%MES+0.7mmol/LKH2PO4+0.4～0.6mol/L甘露醇,pH=5.8酶解处理：以1∶10的量将材料放入酶液。于25℃,黑暗条件下振荡酶解1～5h,转速为80r/min。斤武谗待惑陵婆正职胀闻褥赴花槛阑赤馆陇馋膨提陶垂赊环氟畸更悯桑事高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生9/20/202173.原生质体纯化：酶解后的原生质体和酶混合液经250目的尼龙
5、网滤过后以800r/min离心8min沉降原生质体。向沉降的原生质体中再加入洗涤液和液体培养基各清洗1次备用。洗涤液：10mmol/LCaCl2·2H2O+0.1%MES+0.7mmol/LKH2PO4+0.4mol/L甘露醇,pH=5.8液体培养基：1/2MS+1mg/L2,42D+0.5mg/LZT+0.5mol/L甘露醇+500mg/L水解酪蛋白。炉梭督坯矗蒸束尺菠吝砂抄亢老虐恍嘎钢叶纯的蛋扒患宇沿渠徒舱捏樱岿高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生9/20/202
6、184.原生质体存活率及产量的测定：活力测定:采用EvansBlue染色法，存活率=(未染蓝细胞数/细胞总数)×100%。原生质体产量:用血球计数板进行计数,以每克鲜质量组织获得的原生质体个数(个/g)来表示.蜕司萄蓄宅鸥兵袋赚茹坚源撒木投联妆雷厅敲阿侍挛含烈予肋圈耐隧跋斥高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生9/20/202195.原生质体培养：将原生质体密度调到210×105个/mL,转入原生质体液体培养基中进行液体浅层黑暗静置培养。在培养过程中每10d以3∶1(原
7、生质体培养基∶无渗透压调节剂培养基)比例加入无渗透压调节剂培养基,逐步降低渗透压。停玩天雕沤负森灸晌论渡签搪喂姐喷蝴澈豢弦鹤蔼触凸椿镭锹炯赁绷掺念高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生9/20/2021106.愈伤培养与植株再生:当多细胞团进一步增大,形成肉眼可见的小愈伤组织时,挑出并转移到愈伤组织培养基MS+6-BA2mg/L+NAA0.5mg/L,转为光照培养之前,首先经过2～3d的弱光培养锻炼阶段,然后转入光照培养,继续培养约1个月时间。经3次继代培养后,挑选鲜绿
8、色愈伤组织转入芽分化培养基MS+1mg/L6-BA+0.1mg/LNAA,待小芽长至2.0cm左右,切下转入生根培养基上形成完整植株,生根培养基为1/2MS。培养基pH=5.8-6.0,琼脂6g/L,蔗糖25g/L,在1.2kg/cm2压力下灭菌20min,培养温度(25±2)℃,光照强度为2000～3000lx,每天光照12h。嗡稗豹辰跳矩老洲任单贱鄂入衍簧履渤竭报涪藩舆祖御四陶屯捻
