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时间:2020-07-21
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1、专题2微生物的培养与应用课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数尿素分子的立体结构CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3脲酶两个主要目的:(1)从土壤中分离出能够分解尿素的细菌;(2)统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。研究思路美国黄石国家公园的一个热泉(一)筛选菌株水生耐热细菌Taq(Thermusaquaticus)耐高温的TaqDNA聚合酶美国微生物学科布鲁克(T.Brock)1966年发现耐热细菌选择培养基在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。(二)统计菌落数目统
2、计菌落数目的理论依据:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。因此,恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确,通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上,培养后再选择菌落数在30~300的平板进行计数。?说明设置重复组的重要性。第一位同学只涂布了一个平板,没有设置重复组,因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题,涂布了3个平板,但是,其中1个平板的计数结果与另2个相差太远,说明在操作过程中可能出现了错误,因此,不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。这个实
3、例启示学生,在设计实验时,一定要涂布至少3个平板,作为重复组,才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时,一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致,结果不一致,意味着操作有误,需要重新实验。注意:统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。因此结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。每克样品中的菌株数=(C÷V)×MC:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V:涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)M:稀释倍数(二)设置对照一是由
4、于土样不同,二是由于培养基污染或操作失误。究竟是哪个原因,可以通过实验来证明。实验方案有两种。一种方案是可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验,如果结果与A同学一致,则证明A无误;如果结果不同,则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。另一种方案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养,作为空白对照,以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出,实验结果要有说服力,对照的设置是必不可少的。实验设计[一]土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右,再取样,将样品装入事先准备好的信封中。[二]样
5、品的稀释为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度?测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量,选用的稀释范围相同吗?这是因为土壤中各类微生物的数量(单位:株/kg)是不同的,例如在干旱土壤中的上层样本中:好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万,放线菌数约为477万,霉菌数约为23.1万。因此,为获得不同类型的微生物,就需要按不同的稀释度进行分离,同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。[三]微生物的培养与观察操作提示[一]无菌操作1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近
6、将称好的土样倒入锥形瓶中,塞好棉塞。3、在稀释土壤溶液的过程中,每一步都要在火焰旁操作。[二]做好标记注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。[三]规划时间结果分析与评价1、结合对照,分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。2、是否获得了某一稀释度下,菌落数目在30——300的平板。在这稀释度下,是否至少有两个平板的菌落数相近?3、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少?与其他同学的结果接近吗?如果差异很大,可能是什么原因引起的?课题延伸CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3脲
7、酶pH升高指示剂(酚红)将变红相关链接(一)空气中微生物总数的检测(二)水中细菌总数的检测(三)牛奶中细菌的分离与计数(四)土壤中真菌(或放线菌)的分离与计数
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