《食品卫生微生物学检验 肠球菌的检验》地方标准修订编制说明.doc

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1、《吉林省食品安全地方标准食品中肠球菌的检验方法》编制说明一、任务来源本标准对《食品中食品卫生微生物学检验肠球菌的检验》地方标进行制定受吉林省卫生厅委托。项目编号：DBS22/018-20121.承担及参加单位本标准负责起草单位：吉林省疾病预防控制中心。本标准主要参加单位：长春市预防控制中心。主要起草人：刘桂华、龚云伟、李月婷、赵薇2.标准制定的主要过程：⑴确立标准制定的基本原则，比较与研究国内相关检验方法的文献报道，并结合大量的实验室方法的研究工作，制定出标准的讨论稿。⑵组织有关参加单位进行实验室比对验证工作，结合比队结果，找出实验过程存在的问题，汇总、分析数据，修改标准文本。⑶撰写《食

2、品卫生微生物学检验肠球菌的检验》标准文本的《征求意见稿》和标准《编制说明》等材料。⑷把标准文本送给十位专家征求意见，汇总专家意见。根据专家意见对标准文本进行完善。⑸提交《食品卫生微生物学检验肠球菌的检验》（送审稿）《编制说明》和《征求意见汇总表》供卫生厅专家审议。二、本标准立项背景肠球菌(Enterococci)5如同粪便大肠杆菌群，为人及动物肠道内的正常菌。与食品有关的肠球菌，系指链球菌属（GenusStreptococcus）中属于LancefieldD群的一群革兰氏阳性球菌，主要包括S.facealis、S.faecium及S.durans三种菌。这些菌在10℃以下至45℃以上，均

3、能生长；而且在含6.5%NaClpH9.6的环境也能生长，并能耐60℃加热30分钟。肠球菌的检测做为粪便污染指标菌比大肠杆菌群检测为佳的理由：(1)在粪便中肠球菌菌数表比粪便大肠杆菌群菌数少很多；(2)在自然界不易增殖，因此在水或土壤等分布甚少；(3)食品制造时，经加热或冷冻，大肠杆菌比肠球菌容易受损伤或死亡。应用于测定生蔬菜及色拉、冷冻食品、肉制品及干燥食品，检测肠球菌作为评估加工设备之清洁和消毒的有效性。肠球菌是人类和温血动物肠道内的正常菌群，以前一般都认为该属菌对人类无害，但近年研究已证实它可引起多种感染，属医院感染的主要病原之一。该菌属的某些生化型也可引起食物中毒。目前该菌多作为

4、生活饮用水，管道水和一些水质的指示菌。卫生学家认为，肠球菌类似于大肠菌群的生态活动，但其对恶劣的外环境和冷冻条件具有较强的抵抗力，作为监测水质卫生，环境卫生质量的污染指标更具有卫生学意义。另据有关报道，大量的（１０9以上）肠球菌可以引起食物中毒，作为一个有卫生学意义的细菌（该菌的污染在某些食品中也常被发现），有些国家已经制定了针对肠球菌污染限量标准，大多制定在０／g～１０5／g范围内。从预防食物中毒方面，保障人民身体健康考虑，借鉴国外标准，制定适宜的污染限量指标，应尽快摆到议事日程上来。三、本标准的主要依据：经查FDA、USDA和我国均无相应国家标准报告。1.SN/T1933.1-200

5、7《食品和水中肠球菌检验方法第一部分：平板计数法和最近似值测定法》2.国内杂志公开报道的肠球菌检验方法的文献。5四、增加的内容1.商品化鉴定系统的应用《食品卫生微生物学检验肠球菌的检验》因现无国家标准，FDA、AOAC、USD也无标准方法。该标准应用了VitekGNI＋全自动微生物免疫分析仪）或API20strep试剂条1（法国生物梅里埃公司）。这些方法都比较成熟，稳定性较好，已被许多国家和组织的标准采用，鉴定效果很好。2.快速筛选方法的应用本标准采纳“固定酶底物法测定食品中肠球菌”作为快速筛选方法。采取自然样品和人工染菌的方法，利用常规方法和酶底物法同时测定，并对检测数据进行统计学处理

6、，比较方法的差异程度，判定酶底物法测定食品中肠球菌的可行性。该方法既快速（24h）灵敏度、特异性又高。五、主要进行的实验室验证试验1.人工染菌，利用倾注法、MPN法及酶底物法对标准肠球菌的脑心肉汤24h培养物进行含菌量的检测，分别是：倾注法检出2.2×108cfu/mL;MPN法检出3.6×108cfu/mL;酶底物法检出2.3×109cfu/mL;结论：三种方法比较酶底物法更敏感。利用标准菌株肠球菌菌悬液，对20份米粉进行人工染菌，再利用三种方法进行最低检出线的检测（三种方法的比对试验）。结果：倾注法最低检出线13cfu/g;MPN法最低检出线8cfu/g;酶底物法3cfu/g.结论:

7、酶底物法灵敏度高.2.酶底物法特异性的实验：利用粪肠球菌（ATCC29212），大肠艾希氏菌（ATCC25922），乙型溶血性链球菌（ATCC32204）及稀释液（生理盐水）按方法二进行试验，结果屎肠球菌为阳性，其他均为阴性。结论该方法的具有高度特异性。3.利用本标准对50份样品进行肠球菌的检测，其中米粉5份、5速冻水饺14份、鲜肉馅15份、中式色拉14份、冰激淋2份。米粉均未检出；速冻水饺检出率100%，菌量在100cfu/g～6