细胞培养失败常见原因及对策.doc

《细胞培养失败常见原因及对策.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、表：细胞培养失败常见原因及对策出现问题可能原因解决办法培养基中pH错误的CO2浓度调节C02浓度快速改变[NaHC02]2-3.7g/L,[C02]5-10%培养瓶盖子过紧稍放松盖子缓冲液量不足加HEPES至最终浓度为10-20mM细菌、酵母和丢弃培养物、避免污染真菌污染细胞不贴壁过量的胰酶消化减少胰酶浓度或消化时间培养基中无粘附因子加大血清浓度或增加粘附因子细菌、霉菌、支原体污染检查并去除污染或丢弃物理、化学污染去除相关污染细胞生长速度降低改变培养基或血清比较培养基中成分,新旧血清比较缺乏促进生长成分传代培养,加新鲜培养基和如谷氨酰胺或生长因子生长促进成分培养基储存不当保存在

2、2-8℃，血清培养基应尽量避光初次细胞接种量少增加细胞接种数量细胞衰老取得新细胞株低度细菌和真菌污染无抗生素的培养基,如被污染，则丢弃支原体污染隔离培养,如污染,丢弃细胞死亡无C02检测C02温度波动检验温度抗生素浓度超量有毒性少量使用抗生素细胞复苏受损重新复苏渗透压错误检测培养基渗透压产生毒性代谢物去除并更换培养基细胞成团悬浮Ca，Mg离子存在用无Ca2+，Mg2离子的平衡盐溶液清洗细胞支原体污染隔离培养,检验支原体污染,如已经污染,则丢弃胰酶过量,细胞DNA释放用DNase处理细胞细胞形态、生长状况改变细胞间污染更换细胞