高中生物 专题五 DNA的粗提取与鉴定导学案新人教版选修1.doc

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1、专题五DNA和蛋白质技术课题：DNA的粗提取与鉴定【课题目标】1、理解DNA粗提取与鉴定原理2、熟悉实验课题的操作过程及相关步骤原理【导学诱思】一、DNA的粗提取与鉴定原理1、提取原理：①DNA与杂质在不同浓度的中溶解度不同，在溶液中溶解度最低；②DNA（能，不能）溶解于酒精溶液，而蛋白质（能，不能）溶解于酒精溶液，利用这一特点能将DNA和蛋白质分离；③蛋白酶能水解，但是对没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80oC的高温，而DNA在以上才会变性。洗涤剂能够瓦解，但对DNA没有影响。可以利用升高温度

2、、添加洗涤剂、加入蛋白酶等方法进行提取除杂。2、鉴定原理：在条件下，DNA遇会被染成色，因此该试剂可以作为鉴定DNA的试剂。二、DNA粗提取与鉴定实验设计流程（1）实验材料的选取：凡是含有的生物材料都可以考虑，但是使用的生物组织，成功的可能性更大。思考：在本实验材料选取时，有人建议使用鸡的红细胞，但也有人建议使用哺乳动物猪的红细胞，你觉得哪种材料更好？说说其中的道理。（2）破碎细胞，获取含DNA的滤液（释放）：如果使用的是鸡的红细胞，怎样才能使其破碎？如果使用的是植物细胞呢？如果研磨不充分，会对实验

3、结果产生怎样的影响？此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？（3）去除滤液中的杂质（纯化）：阅读课本的三个方案，思考下列问题：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？方案二与方案三的原理有什么不同？（4）DNA的析出与鉴定：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积、冷却的，静置，溶液中会出现，这就是粗提取的DNA，用玻璃棒搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各

4、加入4ml的。混合均匀后，将试管置于中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变。三．本实验操作提示①以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g，防止。加入洗涤剂后，动作要、，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。②加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要，以免，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。③二苯胺试剂要，否则会影响鉴定的效果。[问题探讨]1、实验过程中两次用到蒸馏水，这两次使用的目的有什么不同？2、本实验为什么要用冷却的酒精？预冷的酒精溶液有以

5、下优点？3、本实验使用了两种不同浓度的NaCl溶液，它们的作用分别是什么？4、请根据教材DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图思考：①在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？5、制备鸡血细胞液时，在新鲜的鸡血中加入柠檬酸钠的原因是什么？6、盛放鸡血细胞液的容器，为什么要选用塑料容器？7、本实验中有三次过滤：⑴过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液⑵过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液⑶过滤溶解有DNA的

6、2mol/LNaCl溶液。这三次过滤的目的是什么？8、你认为从细胞中提取某种蛋白质与提取DNA一样容易吗？为什么？【反思总结】【高考、模拟题回放】1、（2010·江苏省盐城市高三第二次凋考）在“DNA的粗提取和鉴定”实验中，甲、乙、丙、丁四个小组除下表中所列处理方法不同外，其他操作步骤均正确，但实验结果却不同。下列有关叙述不正确的是（）A．实验材料选择错误的组别是丙B．沸水浴后试管中溶液颜色变蓝的组别是甲、丁C．甲组实验现象差的原因是25℃的酒精对DNA的凝集效果差D．乙组实验不成功仅因为在鉴定时加

7、入了双缩脲试剂2、（2010·江苏高考）某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动。具体步骤如下：材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份．每份l0g。剪碎后分成两组，一组置于20℃、另一组置于一20℃条件下保存24h。DNA粗提取：第一步：将上述材料分别放人研钵中，各加入l5mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤．取滤液备用。第二步：先向6只小烧杯中分别注人10mL滤液，再加人20mL体积分数为95％的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。第三步：取6支试管，分别

8、加入等量的2mol／LNaCl溶液溶解上述絮状物。DNA检测：在上述试管中各加入4mL二苯胺试剂。混合均匀后，置于沸水中加热5min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅,结果如下表。分析上述实验过程，回答下列问题：(1)该探究性实验课题名称是。(2)第二步中”缓缓地”搅拌，这是为了减少。(3)根据实验结果，得出结论并分析。①结论1：与20℃相比，相同实验材料在-20℃条件下保存，DNA的提取量较多。结论2：。②针对结论I．请提出合理的解释：。(4)氯仿密度大于水，能使蛋白