专题五DNA的粗提取与鉴定[1]

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1、专题5DNA和蛋白质技术课题1DNA的粗提取与鉴定提取DNA的基本思路利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。1、DNA在NaCl溶液中的溶解性DNA和蛋白质等成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀；或者让其他成分溶解，DNA析出2、DNA不溶于酒精溶液3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性一、提取DNA的原理DNA不溶于酒精溶液，细胞中某些蛋白质溶于酒精。2、DNA不溶于酒精溶液3、DNA对酶、高温

2、和洗涤剂的耐受性①蛋白酶——水解蛋白质②高温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃而DNA在80℃以上才会变性③洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质但对DNA没有影响（一）实验材料的选取从下列材料中选取2～3种原则：菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞；在液体培养基中培养的大肠杆菌凡是含有DNA的生物材料都可以考虑选用DNA含量相对较高的组织二、实验设计核DNA数目：鸡78条，猪38条，哺乳动物的红细胞0条猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条大肠杆菌

3、1条请选择动植物材料各一种。提示：哺乳动物的血细胞无细胞核及细胞器大肠杆菌等原核生物的DNA含量很少鱼卵是减数分裂的产物（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1、动物细胞2、植物细胞——需要溶解细胞膜鸡血细胞溶液：加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液①加入一定的洗涤剂和食盐②充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液（三）除去滤液中的杂质①DNA的溶解：滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌。②析出含DNA的粘稠物：③滤取含DNA的粘稠物：在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，

4、析出淡黄色丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水，此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L。含DNA的粘稠物留在纱布上。1、DNA的初次溶解与析出：2、DNA的再次溶解与析出：①2mol/L的NaCl溶液含DNA的粘稠物②过滤含有DNA的NaCl溶液：滤液中含有DNA。③提取含有杂质较少的DNA：所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精，溶液中析出出现乳白色丝状物。（四）DNA的鉴定在沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈蓝色DNA的鉴定的原理1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的

5、作用是()。A.稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNAB2.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成()A.砖红色B.橘黄色C.紫色D.蓝色D3.实验中NaCl的物质的量浓度为2mol／L和0.14mol／L对DNA有何影响?答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出4．DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，而细胞中的某些物质溶于酒精溶液。下图为“DNA的粗提取”实验的相关操作步骤，

6、其操作目的错误的是（）A．①是洗涤红细胞、去除红细胞表面的杂质B．②是稀释NaCl溶液至0.14mol/L，析出DNAC．③是选用2mol/LNaCl溶液，溶解粘稠物中的DNAD．④是纯化DNA，去除溶于95%酒精的杂质A5．向溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中不断加入蒸馏水，在这个过程中DNA和杂质蛋白质的溶解度变化情况分别是()A．减小；减小B．增大；增大C．先减小后增大；增大D．减小；增大C试剂操作作用A柠檬酸钠溶液与鸡血混合防止血液凝固B蒸馏水与鸡血细胞混合保持细胞形状C蒸馏水加入到

7、溶解有DNA的NaCl中析出DNA丝状物D二苯胺加入到过滤后DNA的NaCl中产生特定的颜色反应(05广东32)．下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述错误的是()B