专题五dna的粗提取与鉴定[1]

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1、复习：DNA的粗提取与鉴定⑴DNA的溶解性DNA和蛋白质等成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀；或者让其他成分溶解，DNA析出⑵DNA不溶于酒精溶液⑶DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性1、提取DNA的原理DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。⑵DNA不溶于酒精溶液⑶DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶——水解蛋白质，对DNA没有影响②高温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃而DNA在80℃以上才会变性③洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质

2、但对DNA没有影响（1）实验材料的选取从下列材料中选取2～3种原则：菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞；在液体培养基中培养的大肠杆菌凡是含有DNA的生物材料都可以考虑选用DNA含量相对较高的组织2、DNA提取的实验步骤从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。哺乳动物的血细胞无细胞核及细胞器。液体培养基中的大肠杆菌的DNA量减少。鱼卵是减数分裂的产物。（1）实验材料的选取2、DNA提取的实验步骤（2）破碎细胞，获

3、取含DNA的滤液1、动物细胞2、植物细胞——容易破碎——需要溶解细胞膜鸡血细胞溶液：加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液①加入一定的洗涤剂和食盐②充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液2、DNA提取的实验步骤（3）除去滤液中的杂质①DNA的溶解：滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌。②析出含DNA的粘稠物：③滤取含DNA的粘稠物：在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上

4、。1、DNA的初次溶解与析出：2、DNA提取的实验步骤2、DNA粘稠物的再溶解与析出：①20mL2mol/L的NaCl溶液含DNA的粘稠物在20mL烧杯中轻缓搅拌3min，使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。②过滤含有DNA的NaCl溶液：用放有两层纱布的漏斗过滤步骤⑸所得的溶液，滤液中含有DNA。③提取含有杂质较少的DNA：所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。（3）除去滤液中的杂质1.共有“五次搅拌、三次过滤，两次析出”2.加入“两次

5、蒸馏水，两次NaCl溶液，一次酒精”试剂：（二）DNA的鉴定条件：二苯胺沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色沸水浴现象：1.DNA的鉴定的原理2.DNA的鉴定⑴向两支试管中分别加入2mol/LNaCl溶液5ml⑵其中一支试管中加入DNA丝状物⑶各加入二苯胺试剂4ml⑷混匀后，置于沸水浴中加热5min⑸待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化观察现象：溶解丝状物的溶液变为蓝色2.实验中NaCl的物质的量浓度为2mol／L和0.14mol／L对DNA有何影响?1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是()。A.稀释血液、冲洗样品B.使

6、血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA答：B答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成()A.砖红色B.橘黄色C.紫色D.蓝色4.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液?答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白质)。答：D