实验2 线粒体和液泡系地超活染色与观察.doc

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1、中国海洋大学实验报告：常天易系年级：海洋生命学院2012级专业：生物科学科目：分子细胞生物学实验学号：线粒体与液泡系的超活染色与观察一、实验目的1、观察动、植物活细胞线粒体、液泡系的形态、数量与分布；2、学习一些细胞器的超活染色技术。3、观察豆芽根部细胞的液泡分布二、实验原理　　１、詹纳斯绿B染液被线粒体中的细胞色素氧化酶氧化而呈现蓝绿色，在细胞的其他部位因保持还原状态而呈现无色。２、中性红染液为一种碱性染液，易随外周染液进入液泡，因液泡环境偏酸性，所以使液泡被染上红色。三、实验材料黄豆幼根根尖、人口腔上皮细胞，Ringer试剂，詹纳斯绿B染色液，中性红染液四、实验方法黄

2、豆幼根根尖的超活染色（1）、使用中性红染液将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的中性红染液中染色１０分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察（２）、使用詹纳斯绿B染液将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液中染色10分钟盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察（３）、使用詹纳斯绿B和中性红染液混合染色①先加詹纳斯绿B，后加中性红染液将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液中染色10分钟向载玻片上的标本滴加中性红染液再染色１０分钟用吸水

3、纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察②、使用詹纳斯绿B和中性红染液同时染色将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液和中性红染液的混合物中染色10分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察人口腔上皮细胞的超活染色（1）、使用詹纳斯绿B染色用消毒牙签的钝端在口腔上皮轻轻地挂取部分上皮细胞在载玻片上滴加詹纳斯绿Ｂ染液，将牙签上的容物在染液中混匀染色10分钟后，在显微镜下观察（２）、使用中性红染色用消毒牙签的钝端在口腔上皮轻轻地挂取部

4、分上皮细胞在载玻片上滴加中性红染液，将牙签上的容物在染液中混匀，染色10分钟用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液盖上盖玻片，在显微镜下观察五、实验结果1、观察根尖的染况图1、根部伸长区的切片及其在中性红染色下显示的液泡。图2、根部成熟区的切片及其在中性红染色下显示的液泡。图3、根部成熟区用詹纳斯绿B染色，蓝色部位为线粒体，图中液泡因染色较浅而呈现。图4、根部用詹纳斯绿和中性红染液染色，两种试剂同时加入。图5、根部先用詹纳斯绿B染色，后用中性红染色，所示液泡。2、观察口腔上皮细胞的染况图6、口腔上皮细胞用詹纳斯绿B染色，蓝色部位为线粒体。图7、口腔上皮细

5、胞用中性红染色，图中褶皱（箭头所指）为高尔基体。六、思考题1.用一种活体染色剂对细胞进行超活染色，为什么不能同时观察到线粒体、液泡系等多种细胞器？因为詹纳斯绿B染液是通过被细胞色素氧化酶氧化而显蓝色的；中性红染液时通过植物的活细胞大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况下呈酸性反应，因此，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现红色，而进行染色的；染色机制不同，所以无法同时染色。但是实验发现，在詹纳斯绿B染液染色时，在适当的染液浓度围，适当的染色时间里，在合适的细胞（代较为旺盛，线粒体较多）里，詹纳斯绿B染液可以把线粒体染色，而液泡由于染色程度较浅而显现。2、黄豆

6、根尖经中性红超活染色，为什么看到生长点的细胞中液泡多，而且染色深，延长区细胞中液泡数量变少，染色浅？在生长点的细胞，由于分裂很快，所以细胞小、细胞质浓、细胞核大、代旺、液泡多、液泡小，细胞的代较快，所以液泡酸性较强，所以染色液较深；而在延长区的细胞，由于分裂较慢，以延长为主，所以细胞的液泡个数较少、而液泡较大，细胞的代较为缓慢，所以液泡的酸性较弱，所以染色较浅。七、总结与讨论1、通过对图1至图2的对比，通过对根不同部位在光镜下的观察，发现：液泡在分生区较小，数目较少，染色较浅，再向成熟区的过渡中，液泡数目变多，并逐渐有融合之势，染色液逐渐加深。　　2、在通过詹纳斯绿B对根

7、部的染色发现，仅十分钟，詹纳斯绿B只能将表皮附近的细胞染上颜色，这可能是由于植物细胞的细胞壁的阻拦。对被染上色的细胞进行观察后发现，细胞质中线粒体被染成了蓝色，液泡亦被染上颜色，但颜色相对较浅（图3），所以可以看见液泡。　　3、中性红和詹纳斯绿B染液都对黄豆根部细胞染色时，詹纳斯绿B会覆盖中性红染液的颜色，而导致观察结果模糊。　　4、用中性红染液对口腔上皮细胞进行染色时发现，可以较为清晰的看到细胞的高尔基体结构。