线粒体和液泡系的超活染色与观察

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1、线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的1.观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；2.学习一些细胞器的超活染色技术。二、实验原理线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿B是线垃体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 中性红为弱

2、碱性染料，对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。三、实验材料用具：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。 试剂：Ringer溶液：氯化钠0.85g(变温动物用0.65g) 氯化钾0.25g 氯化钾0.25g 氯化钙0.03g 蒸馏水100ml； 10%、1/3000中性红溶液；1/5000詹纳斯绿B溶液。三、实验方法1.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观

3、察(1)取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。(2)实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10~l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)，盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。(3)在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观察。2.黄豆根尖细胞液泡系的超活染色与观察(1)实验前，把黄豆培养在培养皿内潮湿的滤纸上，使其发芽，胚根伸长到1cm以上。(2)用双面刀片把初生的小麦或黄豆幼

4、苗根尖(约1~2cm长)小心切一纵切面，放入载玻片中内的1/3000中性红染液滴中，染色5~10min。(3)吸去染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。(4)进行镜检。四、实验结果人口腔上皮细胞豆芽根尖细胞液泡系三、实验讨论1、用一种活体染色剂对细胞进行超活染色，为什么不能同时观察到线粒体、液泡系等多种细胞器？答：詹纳斯绿B对细胞进行活染时，具有专一性，只对活的线粒体染色，不能专一性地浸染液泡系，但是可以使用詹纳斯绿B-中性红染液对细胞进行活体染色，此时可以同时观察线粒

5、体和液泡系的细胞器。2、小麦或黄豆根尖经中性红超活染色，为什么看到生长点的细胞中液泡多，而且染色深，延长区细胞中液泡数量变少，染色浅？答：延长区中液泡数量少的原因是小液泡合并成大液泡了，染色浅的原因是由于液泡大，中性红的浓度相对低，颜色就浅。3、根尖区的细胞是不是每个细胞都有线粒体和液泡系：答：不是，根冠区的细胞不需要旺盛的代谢，其没有线粒体。