红花 药材饮片补充检验1314.doc

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1、红花【检查】酸性红73金橙Ⅱ柠檬黄胭脂红（1）取本品2g，剪碎，加70%乙醇20ml，离心，取上清液作为供试品溶液。另取酸性红73、金橙Ⅱ、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液10µl,对照试剂溶液5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-冰乙酸（7:1:2）为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视。供试品色谱中，在与金橙Ⅱ对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。上述薄层板再以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水（1:3:3:1:1）为展开剂，

2、展开，取出，晾干，在可见光下检视。供试品色谱中，在与酸性红73、柠檬黄和胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。若出现相同颜色的斑点，或相同位置有干扰不能判断时，则用下列高效液相色谱法验证。（2）照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥD）测定。色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，0.05mol/L醋酸铵溶液为流动相B；按下表进行梯度洗脱：时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0-305→4595→55在432nm波长检测柠檬黄；在485nm波长检测金橙Ⅱ；在509nm波长检测酸性红73、胭脂红。理论板数按金橙Ⅱ峰

3、计算，应不低于3000。对照试剂溶液的制备取酸性红73、金橙Ⅱ、柠檬黄和胭脂红对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml约含25µg的溶液，即得。供试品溶液的制备取上述【检查】（1）项下的供试品溶液，即得。测定法取供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果判断供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。备注：1、必要时可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。建议采用乙腈-0.02mol/L醋酸铵流动相系统。质谱检测参数：装配有电喷雾离子源；扫描

4、方式：金橙Ⅱ、ESL-扫描：酸性红73，ESI+与ESI-同时扫描：柠檬黄、胭脂红ESI+扫描。同时进行一级质谱全扫描、二级质谱全扫描，扫描范围：100-600m/z。2、因柠檬黄保留较弱，建议采用250mm长度规格的液相色谱柱。【检查】偶氮玉红日落黄（1）取本品2g，加70%乙醇20ml，振摇10分钟，滤过，滤液挥至约2ml,作为供试品溶液。另取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml各含0.05mg的溶液，作为对照试剂溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥB）测定。吸取上述供试品溶液及对照试剂溶液各10µl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-正丁

5、醇-乙醇-氨水-水（2:2:3:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与日落黄、偶氮玉红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。若出现相同颜色的斑点，或相同位置有干扰不能判断时，则采用下列高效液相色谱法验证。（2）照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥD）测定。色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05mol/L醋酸铵溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；在波长484nm处检测日落黄；在波长518nm处检测偶氮玉红。理论板数按日落黄对照试剂峰计算，应不低于3000。时间（min）流动相A（%）流动相B

6、（%）0-305→4595→55对照试剂溶液的制备：取偶氮玉红、日落黄对照试剂适量，加初始比例流动相制成每1ml各含25µg的溶液，作为对照试剂溶液。供试品溶液制备：取本品2g，加初始比例流动相30ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。测定法取供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果判断供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。偶氮玉红对照试剂在518±2nm处显示最大吸收；日落黄对照试剂在484±2nm处显示最大吸收。备

7、注：必要时可采用高效液相色谱-质谱联用法验证。