植物基因转化的受体.ppt

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1、第七章Genetictransformationinplant目录转基因技术现状及其应用植物遗传转化技术载体构建遗传转化操作转基因鉴定2第三节载体构建3TransformationCassettesContains1.GeneofinterestThecodingregionanditscontrollingelements2.SelectablemarkerDistinguishestransformed/untransformedplants3.InsertionsequencesAidsAgrobacteriuminsertio

2、n4Let’sBuildAComplexCassettepB19hpc(GoldenRiceCassette)TLTRaphIV35SGt1psy35SrbcScrtlHygromycinResistancePhytoeneSynthasePhytoeneDesaturaseT-DNABorderT-DNABorderSelectableMarkerGeneofInterestGeneofInterestInsertionSequenceInsertionSequence51.geneofinterestBasedonwhatyouar

3、edoingandwhatyouwanttogetQualityStresstoleranceSecondarymetabolism6Acloningsiteforthegeneofinterest72.SelectablemarkerAllowsthetransgenicplantstosurviveunderstringentselection.CodingRegionGenethatbreaksdownatoxiccompound;non-transgenicplantsdieex.:nptII[kanamycin(bacteri

4、alantibiotic)resistance]aphIV[hygromycin(bacterialantibiotic)resistance]Bar[glufosinate(herbicide)resistance]8EffectofSelectableMarkerTransgenic=HasKanorBarGenePlantgrowsinpresenceofselectivecompoundPlantdiesinpresenceofselectivecompoundNon-transgenic=LacksKanorBarGeneX9

5、Aselectablemarkergene抗性素类kanamycinresistance,nptIIhygromycinresistance,hpt除草剂类bargene(forresistancetoherbicidephosphinothricin)草胺膦DHFRgene(forresistancetomethotrexate)甲氨蝶呤ESPSgene(forresistancetoglyfosate)10常用抗生素抗性酶基因新霉素磷酸转移酶基因(NPTII)，抗卡那霉素潮霉素磷酸转移酶基因（HPT），抗潮霉素(hygromycin

6、)11nptⅡ基因在植物基因工程中被广泛使用，来源于细菌转座子Tn5上的ahpA2。该基因编码氨基糖苷-3’-磷酸转移酶（aminnoglycoside3‘-phosphotransferaseⅡ）。NptⅡ使ATP分子上的γ-磷酸基转移到抗生素分子上，影响抗生素与核糖体亚基的结合，从而使氨基糖苷类抗生素（新霉素、卡那霉素、庆大霉素、巴龙霉素和G418等）磷酸化失活。12HPT潮霉素是一种很强的细胞生长抑制剂，对许多种植物都产生很高的毒性。而潮霉素磷酸转移酶基因产物通过酶促磷酸化作用能使潮霉素失活，从而产生抗性。13常用抗除草剂基因ba

7、r基因，产生PPT乙酰转移酶，抗Bialaphos或glufosinate草铵膦EPSP基因，产生5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶，抗glyphosate草甘磷GOX基因，产生草甘膦氧化酶,降解草甘膦143.Reportergenes:scorablemarkergene具有两大特点（1）便于检测；（2）其表达产物及产物的类似功能在未转化的植物细胞内并不存在。optional,butveryuseful15Reportergenesbeta-glucuronidaseactivity(GUS)greenfluorescentprot

8、ein(GFP)chloramphenicolacetyltransferaseactivityluciferaseactivity16(1)GUS基因Gus基因编码β-葡萄糖苷酸酶（β-glucuroni