植物基因工程中目的基因的转化方法.pdf

《植物基因工程中目的基因的转化方法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第23卷第1期吕梁高等专科学校学报207年3月M〕1.23NO.1JournalofluliangHigherCollegeMar.ZIXj7植物基因工程中目的基因的转化方法冉翠香(山西大学生命科学系，山西太原030006)摘要:植物基因工程中目的基因的转化方法有间接转化法和直接转化法，主要阐述各种转化方法的原理、特点，以期为植物转基因方法的选择提供帮助.关键词:植物基因工程;转化方法;间接转化法;直接转化法中图分类号:Qsl3文献标识码:A文章编号:108一7834(207)01刃003一04植物基因工程是通过导入外源基因对植物进入到染色体基因中[2].由于T一DNA能够进行高频率行

2、遗传转化，使植物获得抗虫、抗病、抗逆境、优质的转移，而且Ti质粒和几质粒上可以插入到SOkb的高产以及生产药物等诸多能力，从而使人们最大限外源基因，因此Ti质粒和巧质粒就成为植物基因转度地利用植物资源.在植物基因工程中最为关键的化的理想载体系统.是植物基因工程技术，该技术是以纯化的外源DNA1.1.ITi质粒载体系统导入植物细胞以期获得转基因植物的方法，其内容Ti质粒是Lenent等从根癌农杆菌中分离到的一包括:目的基因的分离和鉴定;植物表达载体的构建;种巨大质粒，可将外源基因置换T一DNA中的非必需植物细胞的遗传转化;转不扮值物细胞的筛选:转基序列使得外源基因整合到受体染色体上而获得

3、稳因植物的鉴定;外源基因表达的检测等1’1.自20世纪定的表达，并能使植物细胞转化为肿瘤状态，大量90年代以来，人们对外源基因导入植物细胞进行了合成冠瘦碱.冠痪碱是根癌农杆菌的唯一碳源，有利大量的研究，先后采用了多种方法对目的基因进行于根癌农杆菌的繁殖和Ti质粒的转移，并进一步扩遗传转化，迄今为止，已经建立了10余种基因转化方大侵染领域.法，这些方法可以分为两大类:即间接转化法和直接随着根癌农杆菌介导法基因转化技术的逐渐转化法.下面就这两类转化方法从其原理、特点作成熟与完善，它已成为常规育种的重要辅助手段，但一简单介绍.在植物基因工程的实际操作中使用野生型的Ti质粒直接作为基因克隆的载

4、体仍然还有一些困难:①Ti1间接转化法质粒分子量很大，很难用常规的方法操作，另外在间接转化法是以生物体为媒介的植物转基因T一DNA区段上不可能找到单一的DNA限制内切酶方法，有农杆菌介导法和病毒介导法.位点，不能插入外源DNA片段;②野生型Ti质粒对1.1农杆菌介导法感染的植物具有毒性并能诱发冠瘦病，导入植物组农杆菌介导法是以农杆菌为媒介对植物进行遗传织使其不能再生出健康的正常植株[3]，因此野生型转化的方法，该方法广泛地应用于愈伤组织、悬浮细的Ti质粒必须经过改造使之成为双元载体和共整合胞、叶圆盘、茎切段、子叶切片、下胚轴切段、大载体才能被利用.田植株花茎的切段和薄层细胞等离体材料的

5、转化，1.1.2形质粒载体系统是目前双子叶植物常用的基因转移方法.它是通过发根农杆菌的Ri质粒与Ti质粒有大致相同的结根癌农杆菌(Agrobacterimtumefaciens)的Ti质粒构.当发根农杆菌侵染植物时，死质粒上的T一DNA可(Tumerin血cingplas而d)和发根农杆菌以转化并插入到植物细胞基因组中，其整合和表达(Agrobacteriumrkizogenis)的形质粒(Rootinducing的结果导致了大量毛状根的产生.经发根农杆菌侵Plas而d)上的一段T一DNA区在农杆菌侵染植物形成染植物形成的毛状根离体培养都能够再生出可育肿瘤的过程中，T一DNA可以被转移

6、到植物细胞并插植株(因此从发展植物基因工程载体考虑，Ri质粒收稿日期:2006一12一01是很有吸引力的[4])，而且许多植物的毛状根在离体培养条件下表现出次生代谢产物的合成能力，产物装的前提下用这种重组的病毒载体感染植物细胞产量较正常植物及悬浮培养细胞的要高15.但由于从而实现外源基因的转移.目前对Ri质粒的了解还不够充分，利用Ri质粒载体利用植物病毒介导法对植物基因进行遗传转系统还比较少，所以主要用在以研究次生代谢为目化效率比较高，但它的安全性受到质疑，主要用于动的的根组织培养工作和研究根瘤的形成上.物的基因转移[91.农杆菌的感染转化具有许多优点:①操作简单2直接转化法不需要特殊

7、仪器，培养周期短;②技术较成熟，转化效率高;③外源基因多以单拷贝或低拷贝插入受体直接转化法(又称DNA直接导入法)，它指不依细胞，稳定性好16);④可利用不同的启动子控制目的赖于生物体将裸露的DNA直接转移到植物细胞和基因在特定的器官进行特异表达;⑤较少出现基因原生质体中，导致细胞转化的技术，与间接转化法相沉默现象;⑥可将较大片段DNA完整地转移到植物比，直接转化法不需构建载体，因此又叫无载体介导基因组中等.不过由于T一DNA可以在植物染色体的