稀有血型血液的保存.ppt

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1、稀有血型血液的保存与临床输注长沙血液中心王赤林全血保存保存方法：低温保存保存温度：4℃±2℃保养液：ACD.ACDA-A/B.CPDA-1等保存时间：ACD21天ACDA-A/B.CPDA-135天红细胞保存低温保存●保存温度：4℃±2℃●保养液：MAP等●保存时间：35天深低温保存（冷冻保存）●保存温度：-65℃以下●冷冻保护剂：甘油●保存时间：十年●解冻洗涤后保存：4℃±2℃，24小时红细胞深低温保存进展1949年发现甘油对牛精子有保护作用，接着应用甘油作保护剂冷冻红细胞获得成功，但没解决去除冷冻保护剂的问题未应用于临床。

2、1956年应用Cohn分离器将冷冻保护剂甘油去除，使冷冻红细胞成功地用于临床，但此法比较复杂，仍未得到广泛推广。1963年发现可用糖液洗涤法去除甘油，冷冻红细胞逐渐在临床得到广泛应用。红细胞深低温保存进展1972年利用不同浓度的氯化钠溶液洗涤红细胞去除甘油。我国于20世纪70年代中期开始红细胞冷冻保存的研究，并于1975年成功应用于临床。由手工制备到半自动设备制备，再到现在的全自动设备制备。经过多年的研究与探索，方法不断改进、日益完善，开创了血液保存的另一重要途径，是现代输血工作中唯一能长期保存红细胞的方法。红细胞深低温保存机理

3、低温损伤盐变性学说：水结冰时使细胞内外产生的高浓度电解质作用于细胞膜，增加了细胞膜对阳离子的通透性并使细胞膜上形成一些小孔，冰融化时水进入细胞引起渗透休克；冰晶的机械作用：冷冻时细胞内外形成冰晶，冰晶作用于细胞膜并使细胞膜产生小孔使细胞膜不可逆地丧失其半透性，解冻后即出现溶血。红细胞深低温保存机理冷冻保护玻璃化的概念：生物材料在由液态向固态转化过程中没有晶体形成或晶体颗粒小于5-10nm。玻璃化是冷冻保存生物材料最有效的方法。冷冻保护措施：1、添加冷冻保护剂,使细胞中水处于容易达到玻璃化状态；2、迅速冷冻和解冻,细胞中水和胶体迅

4、速玻璃化。冷冻保护剂：细胞内保护剂:甘油、DMSO等细胞外保护剂:羟乙基淀粉、甘露醇等。红细胞深低温保存机理冷冻保护剂的种类虽然很多，但大多是在实验室研究和应用，真正比较成熟且大量用于临床的仍然是以甘油为主的保护剂。甘油具有无毒性、中性、分子量小能渗入细胞、与水结合能力强等特点，使水溶液的结晶点明显降低，结晶过程进行缓慢或形成无结晶凝固.甘油与水结合后使电解质浓度降低，减少或避免了膜脂蛋白复合物的变性与磷脂的丢失，以防止红细胞的冷冻损伤。红细胞冷冻方法慢速冷冻法用高浓度甘油处理红细胞，甘油在红细胞中的终浓度约为40%(W/V)；

5、冷冻无需严格控制冷却速率，冷冻降温速度约1-10℃/分钟；冷冻和贮存使用-65℃以下机械冰箱即可。快速冷冻法用低浓度甘油处理红细胞，甘油在红细胞中的终浓度约为18-20%（W/V）；将甘油化的红细胞置于液氮中（-196℃）迅速冷冻，降温速度约100-1000℃/分钟；然后将冷冻后的红细胞置于-120℃保存。冷冻红细胞制备（一）慢速冷冻糖液聚集洗涤制备法原理：pH5.2-6.1，血浆中丙种球蛋白与红细胞的脂蛋白形成可逆性复合物，加入非电解质溶液如果糖、葡萄糖溶液时，离子强度减小，离子间引力也减小，与脂蛋白结合的球蛋白之间又互相形

6、成可逆结合，使红细胞聚集成团沉降，当加入电解质如生理盐水或提高pH时，球蛋白之间的结合又断开，红细胞重新悬浮。甘油配方：甘油（g/v）79.2%、葡萄糖（g/v）8.0%、果糖(g/v)1.0%、EDTA.2Na0.3%制备方法：全血或悬浮红细胞离心去血浆→加入与浓缩红细胞等体积的甘油试剂，室温平衡30分钟→-65℃以下冰箱贮存→临床用血时取出于37-40℃水浴中融化→第一次洗涤：加入50%葡萄糖溶液，待红细胞沉淀后去上清→第二次洗涤：加入10%蔗糖溶液（国外用5%果糖溶液），待红细胞沉淀后去上清→第三次洗涤：加入10%蔗糖溶液

7、，待红细胞沉淀后去上清→悬浮洗涤：加入生理盐水，离心去上清→生理盐水悬浮红细胞。冷冻红细胞制备（二）慢速冷冻盐液离心洗涤制备法原理：用不同浓度梯度的NaCl溶液由高渗过度到等渗，用大容量离心机反复离心或用连续离心机分离、洗脱去甘油。甘油配方：甘油(g/v)57.1%、乳酸钠(M)0.14、氯化钾(mM)5、磷酸氢二钠(mM)5制备方法：全血或悬浮红细胞离心去血浆→加入甘油试剂，室温平衡30分钟→-65℃以下冰箱贮存→临床用血时取出于37-40℃水浴中融化,离心去上清→第一次洗涤：加入9%NaCl和0.9%NaCl溶液(或9%N

8、aCl溶液和羟乙基淀粉溶液)，离心去上清→第二次洗涤：加入0.9%NaCl溶液(或羟乙基淀粉溶液和0.9%NaCl溶液)，离心去上清→第三次洗涤：加入0.9%NaCl溶液，离心去上清→0.9%NaCl溶液（或血浆）悬浮红细胞。冷冻红细胞制备（三）快速冷冻制备法