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1、荧光原位杂交技术(FISH)在 临床病理中的应用与质控广西至科大学一附院病理科王华荧光原位杂交技术(FISH):用带有荧光素标记的核酸探针与组织细胞中待测的核酸(DNA、RNA)按碱基配对的原则进行特异性结合，在荧光显微镜下显示细胞基因状态的方法。FISH在临床病理中的应用辅助病理诊断、判断预后、指导临床治疗一、常用荧光素及滤光片类型荧光素颜色激发波长发射波长常用滤光片Red(红色)592612Red单通道Orange(橙色)559588Orange单通道G/O双通道Green(绿色)497524Green单通道G/O双通道Aqu
2、a(青蓝色)433480Aqua单通道DAPI(蓝色)367452Blue单通道二、常用探针种类单色探针(singlecolorprobe,SC)双色探针(dualcolorprobe,DC)三色探针(triplecolorprobe,TC)双色分离探针(dualcolor,breakapartprobe.DC,BCR)双色单融合探针(dualcolor,singlefusion.DC,SFTrans)额外信号探针(extrasignal.ES)双色双融合探针(dualcolor,dualfusionprobe.DC,DFTran
3、s)单色探针(SC)正常异常CEP8双色探针(DC)正常异常HER2CEP17三色探针(TC)正常异常XYCEP18双色分离探针(DC,BCR)正常异常MYCMYC14181418双色单融合探针(DC,SFTrans)正常异常ABLABL922922BCRBCR额外信号探针(ES)正常异常ABLABL922922BCRBCR双色双融合探针(DC,DFTrans)正常异常IGHIGH14181418BCL2BCL2三、FISH检测 在常见肿瘤中的应用与意义乳腺癌探针:HER2/CSP17（双色探针）HER2基因检测意义：HER2基目
4、扩增的患者预后差:无病生存和总生存期缩短，淋巴结转移几率高，复发凤险高。指导内分泌冶疗：HER2基因扩增患者对内分泌治疗产生耐药。指导合理选择辅助化疗方案：HER2基因扩增患者宜采用紫杉醇化疗和高强度的蒽环类药物方案。筛选分子靶向药物的适用者：HER2基因扩增患者适合使用曲妥珠单抗药物。Her2(-)2G+2RRatio:1/1<2.2/1,Her2FISH(-)Her2(+++)Ratio:>2.2/1,Her2FISH(+)探针：TOP2A/CSP17（双色探针）TOP2A基因两种异常：扩增和缺失。TOP2A基因检测的意义：存
5、在TOP2A基因异常的患者预后差，尤其是基因缺失的患者预后更差。TOP2A基因异常患者对于含蒽环类药物的治疗方案更敏感。非小细胞肺癌探针：EGFR/CSP7（双色探针）EGFR基因异常：扩增和拷贝数增加。EGFR基因检测的意义：30%~40%非小细胞肺癌存在EGFR基因异常.筛选酪氨酸激酶抑制剂适用者：EGFR基因增多的患者，应用Iressa/Tarceva治疗的有效率为35%，疾病控制率高达70%。EGFR(-)2G+2RRatio:<2.0,EGFRFISH(-)EGFR(+)Ratio:>2.0,EGFRFISH(+)滤泡性
6、淋巴瘤探针:BCL2/IGH（双色双融合探针）BCL2基因位于18q21，IGH基因位于14q32.BCL2/IGH融合基因导致BCL2蛋白的过度表达，从而抑制B细胞凋亡，使B细胞持续增殖引发肿瘤。BCL2/IGH融合基因检测意义:辅助诊断FL：BCL2/IGH重排发生在约80%-85%的FL患者中。BCL2/IGH持续阴性的FL患者3年生存率为100%，而阳性者3年生存率只有54%；阴性者3年疾病无进展的患者87.5%，而阳性者只有13%。BCL2/IGH正常BCL2/IGH断裂、平衡易位弥漫性大B细胞淋巴瘤探针：BCL6（双色
7、分离探针）BCL6基因位于3q27，主要有t(3;14)，t(3;22)和t(2;3)3种易位，分别是BCL6与免疫球蛋白Ig的重链(IGH)、λ轻链(IGL)、κ轻链(IGK)区域易位。BCL6基因断裂检测意义目前研究确定至少40%的DLBCL涉及3q27染色体易位或者BCL6基因重排。BCL6阳性患者诊断治疗36个月后，疾病停止发展的比率为82%，携带有BCL6重排的病例预后较好。BCL6断裂BCL6正常套细胞淋巴瘤探针：CCND1/IGH（双色双分离探针）CCND1基因位于11q13，IGH基因位于14q32。CCND1/I
8、GH融合基因导致CCND1蛋白过度表达，可促进细胞增生。CCND1/IGH融合基因检测意义CCND1基因重排和(或)高表达是MCL的特征，FISH探针检测CCND1/IGH的阳性率可以达到96%。CCND1/IGH正常CCND1/IGH断裂易位伯基
