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1、第卷第4期细胞生物学杂志..“.,.,..,,..SocChmCd拼mn517一51855TabataYet。119,7nJ,er,..eta.,,,:ur,:[〕PJaCcer[3幻aLdnLMl1995aLg’,li11双“.,88:1108一1116...375一376-[34〕aCta]do,F,1994,aC月知n,32,437一445荧光原位杂交技术及其应用陈乐真张杰.“(解放军总医院病理科北京l。。853上海市第五人民医院病理科上海2。。240)FI“oreseeneeInSitu(DNP),aminoaeetylfluorene(AAF)等均可用荧光原
2、位杂交技术(Hrzation,。,ybidiFxsH)是近年来生物学领域发于探针标记前两者较为常用通常采用切口平.展起来的一项新技术其运用细胞遗传学和分Niektranslation)或随机引物法(Randem移法(,。子生物学的原理作为细胞生物学和分子生物Pirmer)对探针标记在已知探针DNA结构及,、学之间的桥梁已被广泛用于遗传疾病肿瘤研序列情况下也可采用PCR或RNA逆转录法,。究及临床诊断和治疗监测有着广泛的应用前标记探针通常用于iBotin标记的探针应大于.,SHIO0p,,景IF技术问世于70年代后期曾多用于染b0以上这样标记易成功这是由于DNA,,,色
3、体异常的研究近年来随着IFSH所应用的中dTTP含量<20肠小于kIb以下的探针,.探针种类的不断增多特别是全Cosmid探针不易标记成功对较小的探针可采用PCR技术,。及染色体原位抑制杂交技术的出现使IFSH来标记如探针是具有重复序列的DNA或枯、,,粒YAC探针在杂交液中加上用超声断碎的技术不仅在细胞遗传学方面而且还广泛应用,、。,于肿瘤学研究如基因诊断基因定位等原有人体胎盘组织DNA或CotDNA以阻断探针。,和染色质之间非特异性的结合荧光信号在高的同位素原位杂交技术存在着较多缺点诸如每次检测均需重新标记探针、已标记的探针表压汞灯产生的短波激发光下常引起荧光信号
4、淬、,,现出明显的不稳定性需要较长时间的曝光时灭为防止淬灭的发生可将DAIP或IP稀释.一eneneone[,〕.间和对环境的污染等与之比较IFSH则具有于Pphldimi的甘油缓冲液中任何,,,①操作简便探针标记后稳定一次标记后可荧光显微镜均可用于观察FISH信号但对单。,。。使用二年②方法敏感能迅速得到结果③拷贝探针的信号需要质量较好的荧光显微镜,。在同一标本上可同时检测几种不同探针④如采用双色或多色滤光片可以同时观察、exas一,不仅可用于分裂期细胞染色体数量或结构变化FITCTRed等多种颜色的FISH信号不,论是染色体SH的研究而且还可用于间期细胞的染色体数
5、量还是单拷贝基因的FI信号均可。,及基因改变的研究本文就FISH技术特点及用高度敏感和高分辨率的彩色胶片摄取也可其应用作综述。通过CCD(ehargeeoupleddeviee)的照相系统或Laserseanningeonfoealimagingsystem(激、一FISH的技术特点光扫描共焦成像系统)将摄取的信号储存在计,,算机内经软件处理后将信号显示在荧光屏。,FISH选用的标本可以是分裂期细胞染色上由于有多种方法标记DNA探针故一次杂。,体也可以是间期细胞间期细胞可以是冰冻切交可以同时观察多个探针的信号如两个不同,。BiotinDioxenn,片也可以是细胞滴片
6、或印片生物素的探针分别用和gigi标记杂otn,oxenn,ntrophenyavn一一一exas一e(Bii)地高辛(digigi)diil交后用idiFITC和抗DigTRd分别细胞生物学杂志1999年oinDioxienn,sH与探针上的Bi和i结合应用lF技术十分有助于肿瘤细胞遗传学的研。,,Hopman采用IF双色滤光片在显微镜下就可以同时看见带有究SH技术研究膀胧癌发现一绿色荧光的IFTC和红色荧光的TexasRed9信号染色体的丢失是膀胧癌早期恶变的一个标。,,。,,号同理采用三种或三种以上不同的半抗原记而且随着疾病进展有额外的1号染色体Biotn、,,
7、。如iDig和DNP等标记探针然后用多出现同时常有四倍体改变6j[Dekken研究胃,,,种不同颜色的荧光素如IFTC(绿色)罗丹明癌时发现多数胃癌细胞呈现多倍体改变而且,。(红色)AMA或CaseadeBlue(兰色)等结合抗伴有Y染色体丢失IFSH检测的结果与流式,。an体进行检测可同时得到多种不同颜色的荧光细胞仪分析的结果完全一致Waldm等发现,,信号如采用不同的排列组合最多可同时检测染色体数目的改变和肿瘤的分化及分期有着密。7种不同的探针川由于常规的荧光显微镜的,如7号染色体增加常见于有较高的切关系,,、照像系统限制了这种a彩色胶片不易多次
