高效液相色谱法知识讲解.ppt

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1、高效液相色谱知识讲解第1页/共49页内容概要工作原理结构组成常见故障与维护HPLC概述HPLC应用第2页/共49页高效液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的一项高效、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重要手段。色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationphase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。一、HPLC简介第3页/共49页HPLC是

2、在经典的液相色谱法基础上发展起来的，其以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。其分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加精细，需高压泵推动，柱效高，分析速度快。与气相色谱不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程，其组成、比例和pH值可灵活调节，分离模式多样。在实际操作中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留值和选择性，从而使不同样品得到分离。第4页/共49页高效液相色谱法自20世纪60年代问世以来，由于使用了高压输液泵、全多孔微粒填充柱和高灵敏度检测器，实现了对样品的高速、高

3、效和高灵敏度的分离测定。高效液相色谱由于吸取了经典液相色谱的研制经验，并引入微处理机技术，极大的提高了仪器的自动化水平和分析精度。现在用微处理机控制的高效液相色谱仪，其自动化程度很高，既能控制仪器的操作参数(如溶剂梯度洗脱、流动相流量、柱温、自动进样、洗脱液收集、检测器功能等)，又能对获得的色谱图进行收缩、放大、叠加，以及对保留数据和峰高、峰面积进行处理等，为色谱分析工作者提供了高效率、功能齐全的分析工具。第5页/共49页高效液相色谱法的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制

4、，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20%，而80%则需用高效液相色谱来分析。HPLC因其具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析和分离高沸点且不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、药物及临床分析，世界各国己将该法收载于药典。第6页/共49页液相色谱检测器UV–VISFLDDADELSDECDRID液相色谱检测器火焰离子化检测器、手性、化学发光、核磁

5、共振、质谱检测器等新型检测技术第7页/共46页第7页/共49页HPLC的特点GC与LC的比较测定对象拓展检测器不同第8页/共49页由于HPLC分析不受温度和样品沸点限制，因此具有更广阔的应用潜力。经过30多年的迅速发展，高效液相色谱法在基础理论、仪器装置和色谱柱等方面的研究已趋于成熟，现已成为化学化工、环境、药学、食品等多个领域中最具优势的分离分析方法之一。第9页/共49页第二节基本原理液相色谱根据分离机理的不同可分为：液固吸附色谱液液分配色谱离子交换色谱离子对色谱法分子排阻色谱(或凝胶渗透色谱)第1

6、0页/共49页（一）液-固吸附色谱流动相为液体，固定相为固体吸附剂，根据物质吸附作用的不同来分离物质。第11页/共49页流动相和固定相都是液体的色谱法即为液-液色谱，是利用样品组分在两种不相溶的液相间的分配来进行分离。一种液相为流动相，另一种是涂于载体上的固定相。流动相极性小于固定相极性的液-液色谱法称为正相分配色谱法。流动相极性大于固定相极性的液-液色谱法称为反相分配色谱法。（二）液-液分配色谱第12页/共49页（三）离子交换色谱（四）离子对色谱法（五）分子排阻色谱法第13页/共49页1100/1200H

7、PLC仪器的结构组成：在线脱气机(G1322A,G1379A/B)二元/四元泵(G1310A,G1311A,G1312A/B)自动进样器(G1313A,G1329A/B,G1367A/B/C/D)柱温箱(G1316A/B)二极管阵列检测器(G1315A/B/C/D)数据处理系统三、HPLC结构组成第14页/共49页HPLC系统溶剂传输系统：心脏高压泵样品引入系统：进样器样品分离系统：关键色谱柱信号检测系统：检测器数据处理系统：软件第15页/共49页泵的基本原理往复活塞泵(单向阀)弹簧隔板/红宝石球串联柱塞泵

8、消除流量脉冲并联柱塞泵减小流量脉冲第16页/共49页仪器：四元泵不是４个泵／必配真空脱气机／二元泵各控制一种溶剂四元泵ＭＧＧＶ在起作用ＭＧＧＶ：比例阀ＡＩＶ：　主动阀ＯＢＶ：　单向阀第17页/共49页仪器：手动进样器-六通阀/定量环六通阀定量环LoadInject通废液口进柱定量环第18页/共49页仪器：自动进样器自动进样100样品盘/机器手/自动洗针机械手样品盘第19页/共49页色谱柱：柱温箱、色谱柱外挂架柱