常规透射电生物样品制备技术.doc

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1、常规透射电镜生物样品制备技术一、取材：组织块约1mm3，悬浮细胞离心后体积约1mm3二、固定：2.5%戊二醛，4冰箱固定1.5小时或更长时间用0.1M磷酸缓冲液漂洗20min3次2%锇酸固定液固定1.5h用0.1M磷酸缓冲液漂洗5min2次三、脱水：30%乙醇5min50%乙醇5min70%乙醇10min，可4冰箱过夜。以上操作在冰盒里进行80%乙醇15min95%乙醇15min100%乙醇（无水硫酸钠处理）20min2次100%丙酮（无水硫酸钠处理）15min2次四、渗透：纯丙酮+包埋液(1:2)室温1-1.5h纯包埋液室温过夜五、包埋：用812包埋剂将样品包埋在包埋槽37烘箱内过夜

2、45烘箱内12h60烘箱内48h六、超薄切片机切片70nm七、2%醋酸铀-柠檬酸铅双染色八、透射电镜观察，拍片。