柞蚕丝素蛋白-羟基磷灰石-BMSCs组织工程化骨修复老龄动物骨缺损.pdf

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1、·．BMSCs71595·柞蚕丝素蛋白一羟基磷灰石．BMSCs组织工程化骨修复老龄动物骨缺损张继波杨依勇孔令菊裴丹姚素艳。郑德宇(辽宁医学院解剖学教研室，辽宁锦州121001)[搞要】目的探讨柞蚕丝素蛋白．羟基磷灰石一骨髓间充质干细胞(TSF-HA—BMSCs)构成的组织工程骨对兔桡骨缺损的修复作用。方法将TSF．HA与成骨诱导后兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行复合，构建新的组织工程骨。取36只12月龄老龄日本大耳白兔于左侧桡骨中段造15mm长的骨缺损区。实验分为3组(A、B、c组各12只)。A组：TS

2、F-HA+BMSCs，B组：HA+BMSCs，C组：无支架组。分别在术后8和12W摄取x线片，观察骨缺损区的修复及骨塑性情况，骨缺损区组织标本采取HE染色进行组织学观察，比较8和12W各组的骨修复情况。结果成功培养出了BMSCs，且细胞在材料表面生长状态良好。骨缺损修复术后8、12Wx线检测显示，A组骨缺损的修复效果最好，B组次之，c组几乎没有修复作用，各组间差异有统计学意义(P<0．05)；HE染色表明，8W时与B组或C组相比，A组新骨生成最多，骨修复最快，差异有统计学意义(P<0．05)；12W后取桡骨

3、观察证实：实验组支架大部分被吸收，骨折处密度增高，骨质发白，实验对照组可见部分支架未被吸收，但骨折愈合良好；空白组骨缺损处被结缔组织填充覆盖。结论TSF．HA组织程化骨具有很好的骨缺损修复能力，有望成为新骨缺损修复的替代材料。[关键词)柞蚕丝素蛋白；羟基磷灰石；骨髓间充质干细胞[中图分类号】R68[文献标识码]A[文章编号]1005-9202(2013)07-1595-03；doi：10．3969／j．issn．1005-9202．2013．07．049现代骨修复技术主要有自体骨移植、异体(同种或异种)骨似

4、，包装后经co消毒备用，该材料由辽宁医学院解剖教研室移植和人工骨材料移植。作为治疗骨缺损金标准的自体骨移郑德宇和杨依勇提供。TSF．HA参数为：空隙率66％，平均孔径植和标准方法的同种异体骨移植“，因其缺点如自体骨移植8Om，表观密度0．76S／cm3，压缩强度10．1MPa。新西兰大耳的骨来源有限、量不足、副损伤大、供区感染等，异体骨移植可白兔，12月龄，体质量1800—2000g，雌雄不限(由辽宁医学院传播疾病、免疫排斥反应、伦理等问题，导致两种骨移植方法受实验动物中心提供)。到限制。人工骨对于修复骨缺

5、损的价值逐渐显现，但良好的人1．2试验方法工骨材料应满足以下特点：①无毒；②具有一定的机械强度；③1．2．1BMSCs的分离、培养及其成骨诱导取出生24h的乳良好的生物相容性；④生物降解性和降解速率与骨修复速率匹兔，断颈处死，将其浸泡入75％酒精中20rain，无菌分离四肢配等。单一的材料不足以满足上述要求，故研制复合型生物活骨，放入含双抗(青霉素200U／ml、链霉素200ms／m1)的PBS性支架材料是2l世纪人工骨研究面临的挑战。本实验将柞缓冲液内，冲洗2次。更换培养皿，快速清除骨膜等结缔组织，蚕丝素

6、蛋白．羟基磷灰石(TSF—HA)与兔骨髓间充质干细胞剪去两端骨骺，注射器吸取完全培养基(DMEM，10％FBS，青霉(BMSCs)复合构建新的组织工程骨，用于修复老龄兔桡骨缺素100U／IIll，链霉素lOOms／m1)冲洗骨髓腔。将冲洗液离心损，探讨此种新型植骨材料的骨缺损修复作用，希望为临床治(1000r／min，10rain)，弃上清液，吹打管反复吹打底部细胞。疗骨缺损提供一种新的人工骨材料。加入完全培养液，按1×10／ml的密度接种于25ml培养瓶中，置于37℃，50ml／LCO2饱和湿度条件下的培

7、养箱进行培养。1材料与方法48h后换液，以后每隔2—3d换液1次。待细胞达80％一1．1材料90％融合后，0．25％胰酶消化，1：3传代分瓶培养，记为P1。细1．1．1主要试剂成骨诱导剂：B-甘油磷酸钠(美国Sigma公胞生长再次铺满瓶底汇合时消化传代，记为P2。取P2代BM—司)、地塞米松(美国Sigma公司)、L-抗坏血酸(美国Sigma公SCs，加入条件DMEM培养液，每隔3d换液，进行成骨方向的司)。条件培养液：DMEM培养液中加入成骨诱导剂，构成条件定向诱导培养。待培养皿内单层细胞生长近汇合时消化

8、传代，培养液。记为P3。继续使用条件培养液培养，用于后续实验。1．1．2实验材料及实验动物将TSF—HA复合材料制成1．2．2材料与细胞共培养无菌条件下将已灭菌的TSF-HA1．5cIn×0．3cm×0．3cm长方体，与兔桡骨的粗细形状相近复合支架材料置入装有条件培养液培养皿中浸泡24h预湿，紫外线照射下自然晾干。将经过条件培养液诱导后生长良好的第3代BMSCs消化、离心，以5×10／ml密度均匀滴加在预湿基金项