皖西白鹅催乳素基因克隆、表达及主动免疫后就巢行为分析.pdf

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1、第35卷第2期扬州大学学报(农业与生命科学版)VoI．35No．22014年6月JournalofYangzhouUniversity(AgriculturalandLifeScienceEdition)Jun．2014皖西白鹅催乳素基因克隆、表达及主动免疫后就巢行为分析陈兴勇，何艳，时丹，耿照玉(1．安徽农业大学动物科技学院。安徽合肥230036；2．安徽省畜禽产业共性技术研究院，安徽合肥230036)摘要：为研究催乳素(PRL)对地方鹅就巢行为的影响，构建含鹅PRL成熟编码区完整序列的原核表达载体，通

2、过转化EscherichiacoliBL21(DE3)建立稳定的原核表达系统，IPTG诱导下获得胞外重组PRL(rPRL)。选成年就巢期皖西白鹅100只，随机分为5组，A组(对照组)注射等量生理盐水，B组口服溴隐亭，C～E组分别颈部皮下多点注射1、2、4mg·mI一rPRI。间隔10d进行第2次加强免疫，剂量与首次免疫相同。结果表明：rPRI表达量约262．5“g·mL，重组蛋白约占总蛋白质的35．2。经His-tag柱纯化回收，回收率为64．9。与对照组相比，首次免疫后C-E组就巢率极显著下降；二次免疫

3、后D、E组就巢率显著低于其他各组；二次免疫10d后各组间就巢率差异不显著，且均上升至2O以上。产蛋率比较表明，首次免疫后各组产蛋率无显著差异；二次免疫后D组产蛋率显著高于C组，但与其他各组差异不显著。rPRI主动免疫可显著降低就巢率、增加产蛋量，但维持时间较短，且鹅群受环境条件影响显著。关键词：皖西白鹅；催乳素；原核表达；主动免疫；就巢；产蛋率中图分类号：S835．2文献标志码：A文章编号：1671—4652(2014)02—0033—05Cloningandexpressionofgooseprolac

4、tinandtheactiveimmunizationeffectinWanxiwhitegooseCHENXingyong，HEYan，SHIDan，GENGZhaoyu1'(1．CollofAnitaSciand，AnhuiAgricUniv，Hefei230036，China；2．AnhuiInstofAnitaGenIndSciand，Hefei230036，China)MkgTRACT：ThisexperimentwasdesignedtoproducearecombinantPRL(rPRL)

5、foruseinimmunizingWanxiwhitegeeseagainstPRLandtodeterminewhethertheseimmunizationscoulddecreasebroodinessandincreaseeggproduction．ThecompletePRIcodingregionfromWanxi—whitegeesewasclonedandtransformedintoEscherichiacoliBL21(DE3)toestablishastableprokaryoti

6、cexpressionsystemwithrPRLobtainedextracellularlythroughtheinductionofisopropyl-fl-D-thiogalactopyranoside(IPTG)．Wefoundthatapproximately262．5g·mL_。ofrPRLwasexpressed，accountingfor35．2V0ofthetotalcellularpro—tein．AfterrecyclingwithaHis-tagcolumn，theconcent

7、rationofpurifiedrPRLshowedthattherecoveryrateofproteinwasap—proximately64．9(asdeterminedwithLowrymethod)．WethenrandomlydividedWanxi—whitegeese(=100)into5groups(一20pergroup)：Agroupinjectedwithsalineasnegativecontrol，BgrouporallyadministeredwithBromoeriptin

8、easpositivecontrols，C，DandEgroupsubcutaneouslyinjectedwith1，2and4mg·mI～rPRL，respectively．TherPRLinjectionsintomultiplepointsintheneckwereconsideredthefirstactiveimmunization，whereasrPRLinjectionssimilarlyrepeated10d