酶法尿素检测试剂的改进及性能评价.pdf

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1、·３９０·检验医学２０１４年４月第２９卷第４期ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｐｒｉｌ２０１４，Ｖｏｌ２９．Ｎｏ４．文章编号：１６７３８６４０（２０１４）０４０３９００４中图分类号：Ｒ４４６．１文献标志码：ＡＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３８６４０．２０１４．０４．０２１酶法尿素检测试剂的改进及性能评价李俊华（陵县人民医院检验科，山东德州２５３５００）摘要：目的建立一种改良酶法尿素测定试剂，并评估其性能。方法采用酶法测定尿素反应前后吸光度（Ａ）值的变化率并对试剂进行改良，评估其性能。同时与现

2、有酶法试剂及进口和光试剂进行比较。结果现有试剂空白Ａ值为１．８，空白Ａ值变化率为－０．００１８；改良试剂空白Ａ值为１．８，空白Ａ值变化率为－０．００１９；和光试剂空白Ａ值为１．６，空白Ａ值变化率为－０．０００４。现有试剂检测限为０．０３５ｍｍｏｌ／Ｌ、改良试剂为０．０１４ｍｍｏｌ／Ｌ、和光试剂为０．０７５ｍｍｏｌ／Ｌ。分析敏感性现有试剂为－０．０４，改良试剂为－０．１３，和光试剂为－０．０５。改良试剂对高、低值血清的批内精密度分别为０．４５％和０．８５％，批间精密度分别为０．３８％和０．７１％，线性浓度范围为０～３８ｍｍ

3、ｏｌ／Ｌ；改良试剂与和光试剂方法学比对的回归方程为Ｙ＝０．９３Ｘ＋０．４１（ｒ＝０．９９９），估计偏倚低于允许误差；３４２μｍｏｌ／Ｌ结合胆红素、３４２μｍｏｌ／Ｌ非结合胆红素、０．０３ｇ／Ｌ维生素Ｃ、５ｇ／Ｌ血红蛋白、１４５０ＦＴＵ乳糜对改良试剂高、低值样本检测结果均无干扰。结论改良酶法尿素试剂具有更加优越的检测限和分析敏感性，并且自身性能良好，符合相关临床应用要求。关键词：尿素；酶法；性能评价尿素是人体内氨基酸代谢的终产物，构成了（简称和光试剂）购自日本和光公司（批号血液中绝大部分的非蛋白氮，在肝脏内合成，经肾ＴＬ９

4、５３）。脏排泄到尿中，因此其含量取决于蛋白质的摄入、４．校准品改良试剂和现有试剂校准品均购［１］蛋白质分解代谢及肾功能。尿素可自由地从自罗氏公司（批号１６９５１２０１）。和光试剂校准品肾小球滤出，因此是反映肾功能的敏感指标。本为试剂盒自带。研究对现有酶法尿素检测试剂进行了改良，并对５．仪器日立７１８０全自动生化分析仪（日本其性能指标进行了评估。日立公司）。二、方法材料和方法反应温度为３７℃，比色杯光径为１．０ｃｍ，检测一、试剂与仪器主波长３４０ｎｍ，副波长４０５ｎｍ，样本（校准管以校１．现有试剂试剂１（Ｒ１）：１００ｍ

5、ｍｏｌ／Ｌ三羟准品做样本）加Ｒ１混匀，孵育３～５ｍｉｎ后加入Ｒ２甲基氨基甲烷缓冲液（ｐＨ值７．８），８ｋＵ／Ｌ尿素酶，混匀，孵育１．５ｍｉｎ后连续检测３ｍｉｎ吸光度（Ａ）０．５ｋＵ／Ｌ谷氨酸脱氢酶，１．５ｍｍｏｌ／Ｌ二磷酸腺苷，值变化。其中样本用量５μＬ，Ｒ１用量２００μＬ，Ｒ２０．８ｇ／Ｌ叠氮钠；试剂２（Ｒ２）：１００ｍｍｏｌ／Ｌ三羟甲基用量５０μＬ，根据仪器使用说明及分析参数编制检氨基甲烷缓冲液（ｐＨ值９．６），０．３ｍｍｏｌ／Ｌ还原型测程序。现有试剂和改良试剂均采用罗氏校准品β烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，１３．０ｍｍｏ

6、ｌ／Ｌα酮戊定标，和光试剂采用自带校准品定标。二酸，０．８ｇ／Ｌ叠氮钠。三、性能评价测定方案２．改良试剂Ｒ１：１００ｍｍｏｌ／Ｌ三羟甲基氨基有关试剂空白Ａ值及变化率、检测限、分析甲烷缓冲液（ｐＨ值９．１），０．３ｍｍｏｌ／Ｌ还原型β敏感性、精密度、线性范围、方法学比对和干扰试烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；Ｒ２：１００ｍｍｏｌ／Ｌ三羟甲验等评价参照美国临床实验室标准化委员会ＥＰ［２５］基氨基甲烷缓冲液（ｐＨ值７．６），４０ｋＵ／Ｌ尿素系列文件及国内外惯用方法进行。酶，２ｋＵ／Ｌ谷氨酸脱氢酶，３０ｍｍｏｌ／Ｌα酮戊二１．空白

7、Ａ值及变化率在波长３４０ｎｍ（光径酸，０．８ｇ／Ｌ叠氮钠。１．０ｃｍ）处检测，以蒸馏水为样本，重复测定２次。３．进口尿素试剂进口和光尿素测定试剂２．检测限以蒸馏水为样本，用试剂重复测作者简介：李俊华，女，１９７０年生，学士，主管技师，主要从事细胞学检验工作。检验医学２０１４年４月第２９卷第４期ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｐｒｉｌ２０１４，Ｖｏｌ２９．Ｎｏ４．·３９１·定２０次。０．０７５ｍｍｏｌ／Ｌ。３．分析敏感性用３种试剂分别测定尿素浓三、分析敏感性度为１６．７ｍｍｏｌ／Ｌ的样本，记录在试剂规定参数现有试剂

8、的分析敏感性为－０．０４，改良试剂下产生的Ａ值改变，换算为Ａ值变化率。为－０．１３，和光试剂为－０．０５。［２］４．精密度按ＮＣＣＬＳＥＰ５Ａ２文件评价。四、精密度取高值和低值的患者混合血清各１份，测定２０改良试剂测定高、低值血清的批内精密度分次，评价批内精密度；取上述高、低值混合血清各别为０．４５％和０．８５％，