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1、液体双试剂谷氨酸脱氢酶检测试剂盒的评价1.北京市怀柔区中医医院101400；2.北京市怀柔区雁栖医院101407摘要：目的：对一种新的液体双试剂谷氨酸脱氢酶检测试剂盒（GLDH）进行方法学评价。方法：评价北京九强生物技术股份有限公司新型液体双试剂及英国Randox公司干粉谷氨酸脱氢酶检测试剂盒的精密度、线性、干扰因素、最低检测限、相关性以及稳定性。结果：1）九强及Randox试剂的批内精密度和室内精密度良好；2）在1-120U/L检测范围内，九强JARandox试剂稀释线性良好；3）抗坏血酸、血红蛋白、结合
2、胆红素对测定均无明显干扰，抗丙酮酸干扰性能九强优于Randox；4）两种试剂的最低检测限可以满足临床需求;5）九强与Randox试剂在0.7-120U/L,回归方程为y（九强）=1.006x（Randox）-0.108,相关系数为0.999,；6）九强试剂开盖一个月，测定质控稳定性良好，而Randox试剂有明显下降趋势。结论：九强新推出的液体双试剂谷氨酸脱氢酶（GLDH）检测试剂盒分析性能及稳定性良好，抗干扰能力强，在性能及稳定性上均优于进口Randox干粉试剂，可以定量分析样木中的谷氨酸脱氢酶，也更加方便
3、检验科医牛使用。关键词：谷氨酸脱氢酶；精密度；线性谷氨酸脱氢酶（Glutamatedehydrogenase,GLDH；EC1.4.1.3）是一种主要存在于细胞线粒体基质中的酶，人体中以肝脏含量最高，其次为肾脏、胰腺、脑、小肠粘膜及心脏等器官。测定GLDH的方法主要有两种方法。第一种，以谷氨酸为底物，经GLDH催化生成α-酮戊二酸,α-酮戊二酸与重氮化磺酸或2,4•二硝基苯月井腺反应，检测吸光度变化。第二种，以α-酮戊二酸为底物，利用NAD（P）H在340nm下的吸光度变
4、化为测定酶活。第二种方法为德国临床化学会推荐方法，市场上各个厂家均采用该方法，据我们调研，目前进口试剂均为干粉剂型，不方便临床操作使用，而国内有厂家虽为液体剂型，但抗干扰及稳定性不好，最近北京九强生物技术股份有限公司（简称九强）新推出了一种液体双试剂谷氨酸脫氢酶检测试剂盒，我们以进口英国Randox公司（简称Randox）冻干粉试剂作为对照，对其进行了性能评价。1.材料与方法1.1试剂及仪器分别订购北京九强生物技术股份有限公司（液体双试剂，批号：13-0204P）和英国Randox公司（干粉试剂，包括Ria
5、,Rib,R2,需要复溶，LOT：248404）共两个厂家的试剂盒。试剂均使用OlympusAU2700全自动生化分析仪进行测定。干扰物质为单独购买纯物质添加入基质血清得到。1.2样本：使用本院门诊及住院患者的血清样本；1.3测定原理及反应参数1.3.1测定原理：在血清或血浆中首先加入乳酸脱氢酶，将内源性的丙酮酸转化为乳酸清除，然后血清中的GLDH催化试剂中的底物（鞍离子、α-酮戊二酸、NADH）反应，生成NAD+,而NADH的消耗速率，即340nm吸光度的变化速率与GLDH的活力成正比，进而测
6、定GLDH的活力；1.3.2反应参数：Randox试剂为速率法,S：Rl：R2=15：150：30主波长：340nm,副波长410nm,读点16-27；九强试剂也为速率法,S：Rl：R2=16：150：50主波长：340nm,副波长410nm,读点16-27；1.4方法1.4.1精密度：依据美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）EP5-A2文件要求,取高低两个不同水平的GLDH样本，每天测定2批，每批测定2次，评价20天，按照推荐公式，分别计算两种试剂的精密度；1.4.2线性分析：选取高值血清样本,使
7、用低值血清样本进行稀释，分别按照1,1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,稀释高值样本,加上水空白(做为0值),共得到8个水平的样本分别使用各自试剂盒测定，评价试剂线性；1.4.3干扰实验：选取血清基质(约28U/L),加入抗坏血酸(50m"dl),血红蛋白(200mg/dl),结合胆红素(50mg/dl),丙酮酸(500μmol/L)o1.4.4最低检测限：依据NCCLSEP-17A确定GLDH的LoB、LoD和LoQ。空白样品进行60次测定，每日1批，每批重复检测20次，共3天，记
8、录浓度值，计算LOBo5个浓度的低浓度样品做重复测定，测定3批，每批4次，记录浓度值，计算LOD。5个浓度的低浓度样品做重复测定，测定5批，每批8次，记录浓度值，计算LOQo1.4.5相关性实验:选取覆盖检测范围的新鲜血清样本，比较两种试剂的相关性；1.4.6稳定性实验：试剂开启后，在试剂仓内开盖放置四周，隔天测定Randox定值质控品(HN1530,Lot768UN；HE1532,Lot560UE),观察试剂稳
