微卫星标记在刺参（Apostichopus japonicus）人工繁育中亲本识别的应用.pdf

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1、第44卷第5期海洋与湖沼Vb1．44．NO．52013年9月OCEANOLOGIAETLIMNOLOGIASINICASep．，2013微卫星标记在刺参(Apostichopusjaponicus)人工繁育中亲本识别的应用术李雪燕2孙国华2杨建敏2①刘兆存。韦秀梅2王卫军2郭婷婷，2f1．上海海洋大学水产与生命学院上海201306；2．山东省海洋水产研究所山东省海洋生态修复重点实验室烟台264006；3．东营市河El华春水产技术开发有限责任公司东营257236)提要选取8个高多态性的微卫星位点，对

2、240只刺参(Apostichopusjaponicus)幼体和14只疑似亲本进行了亲缘关系的鉴定。通过检测，8个微卫星位点共得到53个等位基因，平均等位基因数为6．63；观察杂合度在0．730—0．902；各位点的多态信息含量为0．696—0．836。通过亲缘关系分析软件CERVUS3．0分析，微卫星位点累积排除概率分别为0．9934、0．9997、0．99999。基于排除法个体基因型判定，有37个子代有1个候选亲本，194个子代有2个及以上候选亲本；基于似然法判定，置信度为80％时，有198个

3、子代个体找到最似亲本。综合排除法和似然法的亲权鉴定，成功为229个子代个体找到它们的亲本，鉴定成功率达95％以上。本研究结果可为刺参育种工作中亲本识别及家系分析提供技术支持和理论依据。关键词刺参；微卫星；亲权鉴定中图分类号Q346刺参(Apostichopusjaponicus)属棘皮动物门、海空问利用效率、减少管理强度的常用手段，但对于一参纲、刺参科、仿刺参属，主要分布在北纬35。一44。些海水养殖动物尤其是对于刺参这种软体性动物来的西北太平洋沿岸，包括黄海、渤海海域，俄罗斯东说，个体标识、家系

4、标识，甚至种群标识，一直是难部沿岸，日本、韩国沿岸。刺参具有较高的营养价值以解决的问题，因此需要寻找简便、可靠的方法用于和药用价值，很受人们的喜爱，是我国海水养殖单品亲缘关系分析。种产值最高的种类之一，在沿海养殖中的经济地位举亲权鉴定，是通过对遗传标记的检测，根据遗传足轻重。但随着刺参人工养殖的迅猛发展，养殖过程规律分析，对个体之间血缘关系的鉴定。关于亲权鉴中出现了生长速度减慢、抗逆性减弱等种质退化的现定的方法，从最初的ABO血型鉴定、血清型鉴定，到象，刺参良种选育的重要性日益凸显。在动物良种选现

5、在的DNA指纹技术，微卫星DNA及线粒体DNA育过程中，亲权关系分析对于指导亲本选留，分析系等。微卫星标记因其具有共显性、高度多态性、模板谱信息，准确评估家系遗传参数，清楚地掌握选育各量要求低和鉴定方便等优点，已成为亲子鉴定技术代的遗传背景，示踪关键遗传信息流向，加快品种选普遍采用的分子标记(Weberetal，1989；Bowcoketal，育进程，避免近交衰退现象等具有重要意义。群系混1994)。微卫星DNA遗传标记均遵循孟德尔遗传规律，养是育种工作中避免环境差异对遗传性状影响、提高子代成对的

6、同源染色体中一条来自父亲，另一条来+山东省自然科学基金项目，ZR2011CM036号；山东省现代农业产业技术体系刺参创新团队刺参育种岗位，2012—2O14；海洋经济创新发展区域示范项目，20130125号；山东省优秀中青年科学家基金，Y231041011号。李雪燕，硕士研究生，E—mail：lixueyan2008．good@163．tom①通讯作者：杨建敏，博士，研究员，E—mail：ladderup@126．tom收稿日期：2013．O1—16，收修改稿日期：2013—03．27海洋与湖沼4

7、4卷自母亲，子代不可能带有双亲都没有的等位基因。通保存备用。过检测遗传标记，能将不是生父的个体否定掉的几由于取得的幼参样品较少，所以采用Chelex．100率称为父权排除率，又称为非父排除率。利用微卫星的方法提取幼参个体DNA。将取得的样品放入0．5mLDNA多态性，即以多个微卫星DNA在一个群体中等离心管中，加纯水洗1次，然后加入200gL5％的位基因频率为基础，通过计算排除概率，便可进行亲Chelex．100和5gL5mg／mL的蛋白酶K，置56~C保温2h子鉴定。所以利用微卫星标记来进行亲权

8、鉴定不仅被以上。取出振荡，100~C保温8min，振荡，13000r／min广泛应用于人类，而且在畜牧(Emeletal，2009；Fer．离心3min，上清用于PCR扩增或放4~C保存备用。nandoetal，2011)方面的应用也普及开来，近年来，1．2．2微卫星位点的选择和PCR扩增条件的优化关于水产动物个体亲权鉴定及家系鉴定方面的研究微卫星位点引物由上海生物工程技术服务有限公司报道也逐渐增多(Dongetal，2006；Nieetal，2012)。本合成，引物序列及目的片段