PDGF-B慢病毒载体的构建及其对SGC7901胃癌细胞侵袭能力的影响.pdf

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1、226O重庆医学2014年6月第43卷第18期·论著·PDGF—B慢病毒载体的构建及其对SGC7901胃癌细胞侵袭能力的影响郭轶，尹江燕，卢小刚，王子卫。△(1．重庆市中医院普外科，重庆400021；2．重庆医科大学附属第一医院超声科，重庆400016；3．重庆医科大学附属第一医院胃肠外科，重庆400016)摘要：目的构建血小板源性生长因子B(PDGF-B)慢病毒载体，建立PDGF-B稳定过表达的SGC7901胃癌细胞株并观察PDGF-B对SGC7901胃癌细胞侵袭能力的影响。方法采用四质粒系统构建PDGF-B慢病毒载

2、体，转染293T细胞包装获得高滴度病毒颗粒；以病毒颗粒转染SGC7901细胞，通过荧光显微镜观察转染效果，并用免疫印迹法检测PDGF-B的蛋白表达；用Tr—answell试验观察SGC7901细胞侵袭能力的变化。结果通过PCR及酶切鉴定成功构建PDGF—B载体；包装并得到高滴度的病毒颗粒；成功转染sGC7901细胞后，免疫印迹法检测到PDGF—B蛋白表达明显升高；Transwell试验证明PDGF—B过表达增强SGC7901细胞侵袭能力。结论成功构建并包装获得PDGF-B慢病毒颗粒，建立PDGF—B稳定过表达SGC79

3、01胃癌细胞株，证明PDGF_B过表达可增强胃癌细胞侵袭转移能力。关键词：血小板源性生长因子；慢病毒属；胃肿瘤；侵袭doi：10．3969／j．issn．1671-8348．2014．18．002文献标识码：A文章编号：1671-8348(20l4)18-2260—04ConstructionoflentiviralvectorpLeno-DCE—PDGF-BanditseffectoninvasionabilityofSGC7901gastriccarcinomacellsGuoYi。YinJiangyan。，L“X

4、iaogang，WangZiwei。(1．DepartmentofGeneralSurgery，ChongqingTraditionalChineseMedicineHospital，Chongqing400021，China；2．DepartmentofUltrasound，FirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China；3．DepartmentofGastrointestinalSurgery，FirstAfJili

5、atedHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China)Abstract：ObjectiveToconstructalentiviralvectorthatstablyexpressplatelet—derivedgrowthfactorB(PDGF—B)andtoinvestigateeffectofPDGF—BoverexpressiononinvasionofSGC7901gastriccarcinomacel1．MethodsTheienti

6、viralvectorpLeno～DCE-PDGF-Bwasconstructedandtransfectedinto293Tcells．Thesupernatantcontainingthelentivirusparticleswasharvestedtodeterminethevirustiterandhightiterlentivirusparticleswasgathered．ThenPDGF-Blentivira1vectorwastransfectedintoSGC7901cellsforconstruct

7、ionofstablePDGF—BoverexpressionSGC7901cells．Western-blotandimmunofluorescencewereusedforevaluationoftheconstructionofstablePDGF—BoverexpressionSGC7901cells．Transwel1testwasusedfordetectiontheinva—sionofSGC7901cells．ResultsThelentiviralvectorwascorrectlyconstruct

8、edandverifiedbysequencing．HightiterPDGF—Blenti—viralparticleswereacquiredsuccessfully．Aftertransfection，SGC7901cellsweregreencolorbydetectionoffluorescencemicro—scope