吐温20增敏同步荧光光谱法测定尿液中1-羟基芘.pdf

《吐温20增敏同步荧光光谱法测定尿液中1-羟基芘.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第7期2010年7月ChineseJournalofAnalyticalChemistry958～962DOl：10．3724／SP．J．1096．2010．00958吐温20增敏同步荧光光谱法测定尿液中1．羟基芘张悦马睿范世华(东北大学理学院分析科学研究中心，沈阳110004)摘要尿液中1一羟基芘作为人体内多环芳烃(PAHs)的代谢产物，是高浓度PAHs职业环境和一般环境中人体接触PAHs的一个灵敏指标，已被广泛用于评价人体和动物与多环芳烃接触的内暴露生物指示物，其含量

2、的测定具有十分重要的意义。本研究建立了人尿中1一羟基芘(1一OHP)的同步荧光测定方法。在Britton—Robinson缓冲溶液(pH2．6)中，以同步波长差AA=34nm进行同步荧光扫描，其同步特征峰的强度与1OHP的浓度呈线性关系。表面活性剂吐温20对1一OHP的同步荧光具有增敏作用。本方法的线性范围为2．5×10～5．0×10～mol／L；检出限为9．5×10mol／L；相对标准偏差(RSD)为0．78％(1．0×10一mol／L，n=11)。应用于实际尿样的测定，加标回收率为93．8％～107．4％。关键词1一

3、羟基芘；同步荧光；尿样；吐温201引言多环芳烃(PAHs)化合物是与人类密切相关、数量最多、分布最广的～类环境致癌物质。其生物有效性部分可通过食物链的富集、迁移，最终影响人类的健康，其强烈的致癌、致畸、致突变作用引起了广泛关注，被列为环境优先监测污染物。1一羟基芘(1一Hydroxyprene，1一OHP)是多环芳烃中的芘类在人体内产生并由尿液排出体外的主要代谢产物，是高浓度PAHs职业环境和一般环境中人体接触PAHs的一个灵敏指标。作为人体内PAHs的代谢产物，尿中1一羟基芘已被广泛用于评价人体和动物与多环芳烃接触的内

4、暴露生物指示物，其含量测定具有重要意义。目前，测定生物样品中1．OHP主要方法是高效液相色谱法～。近年来，气相色谱一质谱(GC—MS)或液相色谱．质谱(LC—MS)联用技术用于1一OHP测定也有报道；Campo等采用GC—MS方法测定人体尿液中12种多环芳烃的羟基代谢产物，以正己烷萃取酶解后的尿样，测定了0．1～1．4g／L范围的1一OHP。Mattarozzi等¨采用酶法水解、顶空固相微萃取、气质联用技术测定了人尿中包括1OHP在内的5种多环芳烃代谢产物，回收率为98％～121％。液相色谱一串联质谱联用技术测定1．OH

5、P的灵敏度更高。这些方法包括液相色谱／大气压化学电离串联质谱法¨和液相色谱电喷雾串联质谱(LC—ESI．MS)法12]；Pigini等_】用固相萃取方法处理酶解后的尿样，用高效液相色谱／串联质谱(HPLC／MS／Ms)方法测定了低至0．005g／L1一OHP；Schiewek等提出了超灵敏的测定1一OHP的方法，以大气压激光电离技术(APLI)为GC／MS界面，测定尿中1一OHP，检出限达到22pmol／L。1—0HP是内源荧光物质，无需衍生可直接进行荧光测定’”。但1一OHP的荧光光谱范围宽，谱图复杂，若用常规的荧光测

6、定，由于尿样中基体复杂，易导致试液中i一0HP的峰形失真。当1一OHP的浓度很低时，峰形改变更加严重，难以进行测定¨。同步荧光分析法具有灵敏度高、操作简便、谱图简单、选择性好、光散射干扰小等特点，目前已有使用十二烷基苯磺酸钠或一环糊精为增敏剂，同步荧光测定1．OHP的文献报道l1。。本实验在对1一OHP的荧光光谱特征进行研究的基础上，以吐温20为增敏剂同步荧光测定1一OHP，并成功地用于人体尿液中1一OHP的测定。2009—12-09收稿；2010-03-03接受本文系辽宁省高校重点实验室(No．2008S093)资助项

7、目$E．mail：shfneLl@sina．COIn第7期张悦等：吐温20增敏同步荧光光谱法测定尿液中1一羟基芘9592实验部分2．1仪器与试剂HitachiF-4500荧光分光光度计(日本日立公司)；雷磁PHSJ一3FpH计(上海精密科学仪器有限公司)；HH．1恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司)。1一OHP标准储备溶液：称取适量1．OHP(98％，美国Aldrich公司)，用乙醇／水(1：1，)溶解，配制成1．0mmol／L的储备液，在冰箱中4℃保存。使用时用二次去离子水稀释至所需浓度；Britton—Robinson

8、(B．R)缓冲溶液：用0．04mol／L磷酸／硼酸／乙酸的混合溶液配制，使用时用0．02moL／LNaOH调至所需pH值。吐温20和无水乙醇(国药集团化学试剂有限公司)；除吐温20为化学纯外，其它试剂均为分析纯，实验用水为二次去离子水。2．2实验方法于10mL棕色容量瓶中依次加入2．0mLB．R缓冲溶液(pH2．6)