培养基和试剂的质量要求.ppt

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1、培养基和试剂的质量要求GB4789.28——2013食品室：赵文目录一贮存二培养基的制备三灭菌四培养基的使用五培养基质量要求贮存脱水合成培养基及其添加成分的质量管理和质量控制脱水合成培养基一般为粉状或颗粒状形式包装于密闭的容器中。用于微生物选择或鉴定的添加成分通常为冻干物或液体。培养基的购买应有计划，以利于存货的周转（即掌握先购先用的原则）。实验室应保存有效的培养基目录清单，清单应包括以下内容：——容器密闭性检查；——记录首次开封日期；——内容物的感官检查贮存实验室自制的培养基在保证其成分不会改变条件下保存，即避光、干燥保存，必要时在5℃±

2、3℃冰箱中保存:通常建议平板不超过2周～4周瓶装及试管装培养基不超过3个月～6个月除非某些标准或实验结果表明保质期比上述的更长。建议需在培养基中添加的不稳定的添加剂应即配即用，除非某些标准或实验结果表明保质期更长；含有活性化学物质或不稳定性成分的固体培养基也应即配即用，不可二次融化。二培养基的配置一般要求实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息，如：培养基名称和类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、pH、培养基体积（分装体积）、无菌措施（包括实施的方式、温度及时间）、配置日期、人员等，以便溯源。二培

3、养基的配置实验用水的电导率在25℃时不应超过25μS/cm(相当于电阻率≥0.4ΜΩcm)，除非另有规定要求。水的微生物污染不应超过103CFU/mL。应按GB4789.2，采用平板计数琼脂培养基，在36℃±1℃培养48h±2h进行定期检查微生物污染。小心称量所需要的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸收含有有毒物质的培养基粉末），先加入适量的水充分混合（注意避免培养基结块），然后加水至所需的量后适当加热，并重复或连续搅拌使其快速分散，必要时应完全溶解。含琼脂的培养基在加热前浸泡几分钟。二培养基的制备pH的测定和调整用pH测p

4、H，必要时在灭菌前进行调整，除特殊说明外，培养基灭菌后冷却至25℃时，pH应在标准pH±0.2范围内。一般使用浓度约为40g/L(约1mol/L)的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/L(约1mol/L)的盐酸溶液调整培养基的pH。如需灭菌后进行调整，则使用灭菌或除菌的溶液。分装将配好的培养基分装到适当的容器中，容器的体积应比培养基体积最少大20%。湿热灭菌湿热灭菌在高压锅中进行，一般采用121℃±3℃灭菌15min，灭菌效果的控制是关键问题，加热后采用适当的方式冷却，以防加热过度。过滤除菌可在真空或加压条件下进行。使用孔径为0.2μm的无菌设备和滤膜

5、。消毒过滤设备的各个部分或使用预先消毒的设备。应对经湿热灭菌或过滤除菌的培养基进行检查，尤其要对pH、色泽、灭菌效果或均匀度指标进行检查。有毒成分添加必要时应在通风柜中进行。过滤除菌检查三灭菌融化后的培养基放入47℃～50℃的恒温水浴锅中冷却保温直至使用，融化后的培养基应尽快使用，放置时间一般不应超过4h。未用完的培养基不能重新凝固留待下次使用。倾注到样品中的培养基温度应控制在约45℃左右。将倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延长储存期限。为了避免冷凝水的产生，平板应冷却后再装入袋中。储存前不要对培养基表面进行干燥处理。四培养基的使用五培养基的

6、质量要求生长特性选择下列方法对每批成品培养基或试剂进行评价：——定量方法；——半定量方法；——定性方法。采用定量方法时，应使用参考培养基进行对照；采用半定量和定性方法时，使用参考培养基或能得到“阳性”结果的培养基进行对照有助于结果的解释。参考培养基应选择近期批次中质量良好的培养基或是来自其他供应商的具有长期稳定性的批次培养基或即用型培养基。五培养基的质量要求生长率按规定用适当方法将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中。每种培养基上菌株的生长率应达到所规定的最低限值。选择性为定量评估培养基的选择性，应按照规定以适当方

7、法将适量测试菌株的工作培养物接种至选择性培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定值。例如：XLD生长率：定量测试(TSA为参比培养基)PR≥0.5选择性：半定量大肠G<5金葡G≤1五培养基的质量要求性能评价和结果解释若按照规定的所有测试菌株的性能测试达到标准，则该批培养基或试剂的性能测试结果符合规定。若基本要求和微生物学要求均符合规定，则该批培养基或试剂可被接受。培养基不能凝固制备过程中过度加热低pH造成培养基酸解称量不正确琼脂未完全溶解培养基成分未充分混匀pH不正确制备过程中过度加热水质不佳外部化学物质污染测定p

8、H时温度不正确pH计未正确校准脱水培养基质量差颜色异常制备过程中过度加热水质不佳pH不正确外来污